[讨论]食用菌菌种退化问题大家谈

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纯度检测

纯度指菌种的纯化(净)程度．不能混有病毒、细菌、霉菌、螨虫、线虫等。除了用肉眼观察判断外．根据染杂对象不同采用以下相应的检测方法。

1病毒检测

主要借鉴植物、动物病毒检测和酶联免疫法。具体做法：提纯待检菌种的病毒，用这种病毒免疫动物(如兔子)，获得抗血清，应用抗原抗体结合的特异性及酶联显色技术进行检测，如果样品中存在病毒，则有颜色显现。

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3 DNA指纹检测  品种之间的种性差异是由于其DNA序列的差异．应用DNA检测技术判断待检菌种与标准菌种的DNA是否有差异．若有．则为两个不同的品种，若没有．则为相同品种。DNA指纹检测的方法很多．但归结起来不外乎寻找可应用于品种鉴别的特异DNA片段．即为分子标记．通过试验．检查两个品种所拥有的各种分子标记是否一样．从而作出判断。

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3、霉菌检测

培养基上霉菌检测  用接种针取少量待检菌种疑有霉菌污染部位．按无菌操作接种于PDA培养基中．25~28℃培养3~4d．出现白色以外色泽的菌落、非待检菌种的菌落或有异味者为霉菌污染物。必要时可用显微观察方法进行观察判断．霉菌一般是低等真菌．没有锁状联合。

棉塞上霉菌检测  用酒精灯把露在试管口(或瓶口)外的棉花塞烧弃．用消毒过的镊子夹出剩余的棉塞．用接种针粘取棉塞底部．转入新鲜 PDA斜面培养基．25~28℃培养3~4d后．按上述介绍方法进行判断。

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2．细菌检测

取少量待检菌种．按无菌操作接入营养肉汤培养液中，25~28℃振荡培养1~2d，观察培养液是否混浊。若培养液澄清，可初步判断为无细菌污染；若培养液混浊．可初步判断为为有细菌污染。为了进一步作出准确判断．可把培养液划线接种营养肉汤平板培养基，25-28℃恒温培养1~2d．观察是否有细菌菌落出现。

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4、活力检测

活力指菌种的生活适应能力和抗逆能力．反映菌种的活力，如菌丝形态、发菌程度、色素、分泌物、菌丝自溶、拮抗线、原基、脱壁等。这些指标都可用肉眼来判断。还可以通过以下试验来检查菌种的活力。

取待检菌种．按无菌操作要求．用接种铲或接种耙铲弃菌种表面(或斜面)一薄层，塞回棉花塞．放于适宜的温度下培养．观察其萌发出新菌丝的能力。

取待检菌种．按无菌操作要求．接入下一级菌种培养基．适宜的温度下培养．观察其萌发出新菌丝及吃料的能力。

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4、螨虫和线虫检测  用接种针挑取取少许待检菌种的菌丝于载玻片上水滴中．撕散菌丝．盖上盖玻片．用lO倍或40倍物镜观察．检查是否有螨虫或线虫存在。

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液体培养鉴定

    配制2％糖水溶液，经常规灭菌消毒，挑取黄豆粒大的菌块，放入100毫升上述溶液中，置于25——28℃温度下培养3——7天后，若液面出现气泡，产生“油皮”，发生浑浊现象，说明菌种本身有杂菌；如果菌块下沉，或迟迟才长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱；如若液面四周的菌丝生长快，且浓白呈棉絮状，则表明菌种生命力强。

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　6、生理特征测定　菌种的生理特征测定包括酶活力测定和遗传分析两方面。酶活力测定主要是进行纤维素酶活力的测定，遗传分析主要是进行酯酶同工酶的检测，以及RAPD检测等,分析该品种的遗传物质是否保持原有品种的特征带,如果遗传分析发现主要标记酶带或扩增带发现变异说明该品种有可能出错或已发生变异, 是劣质菌种。

发酵罐

谢谢田兄。

使用冰柜温控装置要更改，不能结冰的。
硅胶塞有个毛病就是冷凝水消失太慢，菌丝长速慢，最好只用于保存，20mm的硅胶塞使用效果好，因另带透气材料。
摇瓶最好不用棉塞用硅胶塞。

田鸿

QUOTE:

以下是引用发酵罐在2010-1-25 22:24:02的发言：
冰箱还是没冰柜合适，冰箱开关再快，冷气也会迅速“趟走”热空气进入，试管结水，用不了几次棉塞受潮，一直头痛这问题，香菇人老师的冰柜好。现在的冰柜也有带保鲜功能的，只是冰柜的感温电偶不一定在什么地方，受冷凝管的影响启动频繁，它感应的也不是大环境的温度，精度难控制，看来非改不可，冰柜加载部分物体会更好，启动次数少，温差波动也小。冰箱的冷凝水一直是我不愿保藏菌种的原因。
赞成毛老师的做法，我没有牛皮纸，只能用报纸，用塑料膜之类不行，即便拒绝了外部的潮湿，培养基内的水分也会让棉塞受潮，我试过的。顺便问，咱用的牛皮纸是种商品吗？

棉塞通气好，菌丝长得快，但用于冰箱斜面保种，培养基易脱水或试管中出现冷凝水，棉塞也容易受潮发霉造成菌种污染，用硅胶塞（不是橡胶塞）可很好的解决上述问题，硅胶塞也不贵，江苏海门18毫米试管硅胶赛7毛左右一个。同时，建议用能精确控温的西门子冰箱斜面保种，其他冰箱控温不准确。冰柜保种，菌种容易死亡，而且解冻的斜面，培养基完全成水样，转管不便。一般栽培户要自己保种，木腐菌可用木屑加麦麸配制，用50毫升医用玻璃瓶或20毫米的大试管装瓶，硅胶塞塞口，灭菌接种培养冰箱冷藏室保存，香菇，平菇，灵芝等用粗杂木屑，金针菇用陈旧的柳杉或杨树细木屑。蘑菇等草腐菌用发酵稻草秸保种。