[推荐]食用菌制种技术

老玉米

呵呵，够详细的，学习中

蛋菇

真是太全面了------------------------------------

lxfei2000

这是经验的总结，劳动的成果，谢谢

zhaoanxjm

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:35:55的发言：

2.组织分离法 是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。食用菌的子实体实际上是菌丝体的扭结物，具有很强的再生能力，通过菇体组织分离，培养纯种，此种方法简便，取材广泛，不易发生变异，又能保持种性，无论幼菇或成熟菇体，只要是新鲜的，均能分离培养。
(1)香菇、平菇组织分离法 香菇、平菇组织分离时，首先应从出菇早、结菇均匀、生长旺盛的菇木上或菌砖上，挑选发育正常，菇蕾长出不久，边缘尚内卷，菇柄短壮，菇盖肥厚，无病虫害的种菇作分离材料。
分离时，将采好的种菇用清水洗净表面，然后带入无菌室(箱)内，放入0.2%升汞水或75%的酒精内浸泡分钟，取出用无菌水冲洗1～2次，用无菌纱布吸干水渍，放入清洁的培养皿内，用消毒过的小刀把菇蕾纵剖为二，在菇盖与菇柄相接处的部分切取绿豆大小 菌肉（图4-10），移接在斜面培养基中央。
试管接种后放入25℃～27℃恒温下培养2～3天，组织块上就长出白色的菌丝，15天后，菌丝就可以长满培养基斜面。再移接到新的培养基上培育成母种。
（2）黑木耳的组织分离法 由于黑木耳的耳瓣薄，并富有胶质，所以在过去的分离法中很少采用耳片组织分离。其实采取组织分离法，操作容易，方法简便，只要消毒操作严格，分离极易成功。在自然气温下干燥的，贮放期在6个月内的干种耳，分离后均能长出菌丝体。
具体操作：先将干耳浸水6～8小时，然后用冷开水冲洗2～3次，再用清洁纱布或药棉吸干渍水，带入接种箱内，在无菌水中摇动4～5分钟，取出用75%酒精擦洗表面，用无菌水冲洗多次，再将耳片用无菌剪刀将四周边缘去掉，切取0.lcm左右的组织块，接种在试管中部培养基边壁上，以利长出菌丝，接种后放入28℃～300℃的恒温下培养1～2天后，就可看到白色绒毛状菌丝，初期生长较慢，5～6天后生长迅速，1.5天左右就可长满全管。
(3)其它菌类组织分离法 草菇、猴头、灵芝、茯苓等组织分离法操作程序和消毒方法与香菇组织分离相似，培养温度因种类不同各有差异。
草菇选择外形端正、健壮肥大、包皮未破的菌蛋作分离材料，取菌柄与菌伞连接处的组织，接到试管培养基后，放在30℃～33℃温度下培养。
猴头组织分离法首先应选肥大、幼嫩、刺短，生长健壮的子实体，然后用清水洗净表面，将外表菌刺削去后按香菇组织分离操作进行消毒，用无菌解剖刀在子实体上划一条缝用手沿缝掰开，挑起心部小块组织移入斜面培养基中，置于20℃～22℃温度下培养。灵芝的组织分离也是取菌柄与菌盖连接处的小块组织，接种后的培养温度在25℃左右。
茯苓是采用菌核分离，首先应选择个体大而结实，生长旺盛，表面可见裂纹，颜色为紫红褐色，皮薄，肉色白，掰开后可见细小的乳白色或绿豆浆色的浆液，重达1.5kg以上的鲜菌核作为分离材料，所取组织块相对要大点。试管接好后,置于22℃的恒温下培养。为了防止菌种退化。最好各品种每年用组织分离重新分离一次，以确保菌种质量的优良。
3.寄主分离法 寄主分离法是从生长有菇耳的木材中获得纯种的一种方法，也叫种木分离法。常用于黑木耳和银耳的菌种分离。
(1)黑木耳的寄主分离法 黑木耳的耳木分离应在盛产子实体的季节进行。选择经自然孢子繁殖的，结耳多、耳片大、无杂菌和病虫害的耳棒；或选择人工接种在1～2年内出耳，出耳旺盛，朵形大的耳棒做分离材料。
分离前，先把耳木晾干，然后在黑木耳生长最好的部分，锯取约2cm厚的小段，去掉树皮，放入0.1%升汞水溶液或75%酒精内浸泡约1分钟，取出用无菌水冲洗2～3次，再用无菌纱布吸干，放入垫了无菌纱布并已消过毒的小木板上，用灭过菌的利刀把木块四壁劈去，再将种木切成半根火柴杆大的小条，截去两头，移接于斜面培养基上，置于22℃～25℃下培养2～3天，种木条上就可长出白色菌丝，再培养15天左右，菌丝就可长满斜面。再从中挑选菌丝粗壮、生长势强、无杂菌、木耳菌丝特征明显的试管作栽培试验，从中选出表现最好的作为母种繁殖之用。
(2)银耳的寄主分离法 银耳的耳木分离法和黑木耳的耳木分离法基本相同。但更应注意，切取长耳的中间部位，不取耳木两端。因为两端裸露在外，污染率高。将接好种的试管放入23℃～25℃下培养，经2～3天后，在种木块上就会长出白色纤细的菌丝，并延伸到培养基上，约5天后培养基颜色变黄，随着培养时间的延长，培养基的颜色逐渐加深至黑色，并在培养基表面出现浅灰色斑纹的香灰菌丝。经7～10天后种木上出现白色短绒状菌丝，同时分泌白色或淡黄色水珠的银耳发育菌丝。然后选取有发育菌丝的试管，分离扩大，进行瓶栽或段木栽培试验。
其他菌类如香菇、平菇、猴头、灵芝、茯苓等，在没有采摘到子实体的情况下，才采用寄主分离法获得母种。

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:35:46的发言：

(2)孢子的分离
①单孢分离法 是将采集到的孢子单个分开进行培养，让它单独萌发成菌丝而获得纯种的方法。在目前已驯化栽培的食用菌中，蘑菇和草菇等同宗结合型的食用菌，由单孢子培养的菌丝，经双核化后形成的双核菌丝体，一般都具有结实能力，因此可以采用单孢分离法来生产纯菌种。其他的一些食用菌类，如香菇、平菇、金针菇、凤尾菇、毛木耳等异宗结合型食用菌，其孢子具有性别，单个孢子萌发的菌丝无结实能力，必须通过不同性别的单孢子间的结合，才能结实。因此，单孢分离法直接在生产上应用不多，但它却是研究食用菌生物学特性和遗传育种的一项重要技术。
单孢分离技术包括稀释分离法、平板划线分离法、器械分离法和毛细管法。现主要介绍稀释分离法，其具体操作过程如下：
制备无菌水试管 取5支试管，其中1支装10mL蒸馏水，4支各装9mL蒸馏水，经高压灭菌即成无菌水。
制孢子悬浮液 取一接种勺孢子粉，置于10mL无菌水试管中，摇振使孢子分散成悬浮液；用无菌注射器或1lmL的吸管，吸取1mL孢子悬浮液于第2支试管中，摇振使其分散；再从第2支试管中吸取1mL注入第3支试管……如此直至稀释到第5支试管，并取第5支试管稀释液在显微镜下检查，如果孢子是单个的，说明已达稀释目的，否则还须继续稀释。 制培养基平板将琼脂培养基融化至60℃，倒入平皿(直径9cm的培养皿注入15mL即可)，待冷却至45℃左右时，另取2支无菌注射器或吸管，从第4，5支试管中各吸取孢子液0.2mL，分别注入平皿中(每种浓度各接3～4个平板)，与培养基充分摇匀，待凝固后倒置于25℃恒温箱中培养。
挑单个菌落培养纯种 在培养期间，每天要取出观察，严格挑选发育匀称、生长快速的单个菌落，移入新斜面培养基上进行培养即为纯种；如系异宗结合的菌类，则要同时挑选能生育的一对单菌落。
②多孢分离法 就是把许多孢子接种在同一培养基上，让其萌发，自由交配，从而获得纯种的方法。此法简便易行，在食用菌制种中应用较为普遍。常用的方法有以下几种：
直接培养法 将采集到孢子的接收器(装有琼脂培养基的试管或平皿)，直接置恒温箱中培养，待孢子萌发后挑选特征典型的菌落，再转接培养成母种。
斜面划线法 按无菌操作规程，用无菌接种针沾取少量孢子，在PDA试管斜面培养基上自下而上划线，划线时勿用力，以免划破培养基表面。接种完毕，抽出接种环，灼烧管口，塞上棉塞。按照各菌种的菌丝生长温度要求，置恒温下培养。待孢子萌发后，挑选萌发早，长势旺的菌落，转接于新试管培养基上再行培养即成母种。
涂布分离法 用接种环挑取少许孢子至装有无菌水的试管中，充分摇匀制成孢子悬浮液，然后用经灭菌的注射器滴管，吸取孢子悬浮液，滴1～2滴于试管斜面或平板培养基上，转动试管使孢子悬浮液均匀分布于斜面上，或用玻璃利刀将平板上的悬浮液涂布均匀。孢子经恒温培养萌发后，挑选几株发育匀称、生长快速的菌落，移接于另一试管斜面培养基上，恒温培养即成母种。
以上几种多孢分离培养的方法，仅从菌丝生长情况、菌落形态等外部特征进行鉴别，还不能作为菌种优劣最后的根据。为了保证母种的质量，还需要作生物学鉴定，即进行出菇试验，根据其生物学特性和生物学效应等数据，才能确定是否能应用于生产。

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:35:38的发言：

菌种分离与培养
人们采取无菌操作的方法，把某种食用菌从混杂的微生物中，单独地分离开来，这个过程叫做菌种分离。从分离过程中得到的菌丝体纯化后，就是纯菌种。在实验室条件下，以人工使纯菌种大量生长和繁殖的方法，叫做培养。
一、母种培养
(一)菌种分离
菌种分离通常采用的方法有孢子分离法、组织分离法和寄主分离三种方法，三种方法各有特点，可根据不同的菌类和生产条件选择使用。
1.孢子分离法 孢子分离法，是利用成熟子实体的有性孢子能自动从子实体层中弹射出来的特性，在无菌条件下和适宜的培养基上，使孢子萌发成菌丝，而获得纯种的一种方法。
(1)孢子的采集
①种菇的选择 用作分离菌种的种菇，应选择出菇早、朵型好、个体肥大、生长健壮、无病虫害、八成熟的菇体。一进入出菇期，就要注意观察选择，并作好标记。不同的食用菌选择的具体要求是：
香菇 菇型圆整，菇体肥大，柄细而短，菌盖呈深褐色，出菇早，无病虫害，一般为八成熟的子实体。
双孢蘑菇 菇型圆整，光滑直立，颜色洁白，柄粗盖厚，无病虫害，生长快而健壮的单生菇。
草菇 菇型端正，肥大健壮，包被未破，无病虫害的单生菇。
平菇 出菇早，菌盖厚实，重叠丛生，菌柄粗短，色泽鲜亮，尚未散发孢子，八成熟而无病虫害的子实体。
木耳 选朵大、耳片厚、色黑、生长健壮、褶皱多、无病虫害的春耳。
银耳 朵大肉肥、色泽洁白、展片良好、朵型美观、八成熟、无病虫害的子实体。
猴头 形状正常、颜色洁白、出菇早、生长健壮、菌刺丰满、无病虫害的子实体。
金针菇 出菇早而均匀、生长健壮、朵型正常、菌柄长短适中、无病虫害的子实体。
②种菇的消毒 子实体采回后要及时切除基部，并进行表面消毒。对子实体层未外露的种菇(如蘑菇等)，可浸入0.1%升汞溶液中消毒约1分钟，用镊子捏出后经无菌水冲洗数次，再用无菌纱布将表面水吸干；对于子实层裸露的种菇(如香菇等)，只能用75%酒精揩擦菌盖及菌柄表面；而对于银耳、木耳类子实体，却千万不能接触消毒剂，只能置于烧杯中用无菌水洗涤，然后捏起再经无菌水冲洗数次，同样用无菌纱布吸干表面水。
种菇(耳)经消毒处理后即可采集孢子。在采集前，事先要备好孢子收集器和接种箱，将孢子采集器放入消毒锅内以1.5kg/cm2的压力灭菌1小时，然后取出放入已消毒的接种箱内备用。
③采集孢子的方法 根据具体情况，采用下列方法进行孢子采集。
整菇插种法：适用于伞菌类的孢子采集。在接种室(箱)中，将经消毒处理的整只种菇插入无菌孢子收集器里，再将孢子收集器置适温下让其自然弹射孢子(图4—8)。待孢子下落后，将孢子收集器移至无菌室(箱)中，打开钟罩，拿去种菇和支架，将培养皿盖好，并用透明胶纸或胶布封贴保存。
三角瓶钩悬法：适用于不具菌柄的子实体
(如木耳、银耳等)孢子的采集。即在无菌室(箱内)，将耳片用无菌水洗涤，无菌纱布吸干，取一个事先准备好的金属两头钩，经火焰灭菌后一端钩住耳片，另一端钩在三角瓶口上(瓶内装有1cm厚经灭菌的PDA培养基)，加棉塞(图4—9)，置室温下培养1～2天，见培养基表面有一层白色孢子印时，即可移入无菌室(箱)里，取出钩子和耳片，仍塞好棉塞保存备用。
菌褶涂抹法：在接种室(箱)内，取消毒好的菌盖，用经火焰灭菌的接种环，沾上无菌水后准确地直插在两片菌褶之间(切勿使接种环接触到裸露于空气间的菌褶部分，以免粘上杂菌)。轻轻地抹取子实层，将尚未弹射的孢子沾在接种环上，取出接种环，在准备好的斜面培养基上或平板培养基上划线接种，加棉花塞或盖上平皿。此法在野外采种时尤为方便，但仍要无菌操作，且动作要准确、敏捷。
空中孢子捕捉法：凤尾菇、平菇、香菇等伞菌子实体成熟后，大量的孢子会自动弹射出来，在子实体周围用肉眼可见烟雾状的“孢子云”，此时迅速将事先制备好的培养基平板或试管口面迎“孢子云”方向，使孢子附着在培养基表面，随即盖上皿盖或加棉塞即可。

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:34:33的发言：

三、培养基的配制
(一)母种培养基的配制
同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样，但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍，菌丝都能正常生长。现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。
1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)
马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g　　
琼脂 20g 水 1000mL
pH值 自然
2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基)
马铃薯(去皮) 200g 蔗糖 20g　
琼脂 20g 水 1000mL
pH值 自然
以上两种培养基广泛应用于各种菇、耳、猴头类食用菌的培养。其具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管中。
3.马铃薯半合成培养基(一)
马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g　
　 磷酸二氢钾 3g 硫酸镁 1.5g　
　 维生素B1 100mg 琼脂 20g　　
水 1000mL pH值 5.8～6.2
此配方制作方法与PDA培养基相同。不过加入部分化学药品，应在过滤后加入。适用于香菇菌种保藏用，也适于培养平菇、双孢蘑菇、滑菇、金针菇、灵芝和猴头等母种用。
4.马铃薯半合成培养基(二)
马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖(蔗糖) 20g　
　 玉米粉 30g 黄豆粉 10g
酵母膏 2g 磷酸二氢钾 1.5g　　
硫酸镁 0.5g 琼脂 20g
水 1000ml pH值 自然
此配方适合各种菇类。制作时应注意：黄豆粉与马铃薯同时下锅，煮15分钟后再加入玉米粉，以免起糊影响过滤。
5.合成培养基(一)
蛋白胨 2g 葡萄糖 20g　　
磷酸氢二钾 1g 硝酸铵 1g
磷酸二氢钾 0.46g 硫酸镁 0.5g　
琼脂 20g 水 1000mL
6.合成培养基(二)
葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 0.5g
氯化钠 0.2g 碳酸钙 2g
　　　琼脂 20g 水 1000mL
酵母汁(1：10) 100mL 硫酸镁 0.2g
将上述原料分别放入锅内，加水放入琼脂加热，并经搅拌熔化后即可分装试管。此配方适合双孢蘑菇、平菇、金针菇、滑菇等菌种培养。
7.蛋白胨葡萄糖培养基
蛋白胨 10g 葡萄糖 10g
　　 琼脂 20g 水 1000mL
　 pH值 5～5.5
将琼脂放入1000mL溶液中煮熔，再加入其他营养物后搅拌溶解，即可分装试管。主要用于竹荪母种培养。
8.葡萄糖蛋白胨培养基
葡萄糖 30g 蛋白胨 15g
　　 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁 0.5g
琼脂 20g 水 1000mL
制作方法同上，主要用于茯苓母种培养。
9.苹果汁培养基
苹果 100g 蛋白胨 2g
　 蔗糖 20g 琼脂 20g
水 1000mL pH值 自然
将苹果洗净，切片，放入锅内加水1000mL，煮沸20分钟，过滤后取滤汁倒入锅内，补水至1000mL，然后加入琼脂熔化，加糖搅拌均匀即成。主要用于草菇母种培养。
10.棉籽壳汁培养基
新鲜棉籽壳 250g 葡萄糖 20g　　　
琼脂 20g 水 1000mL
取棉籽壳煮汁1000mL，加入其它营养成分即成。适合猴头、黑木耳等代料栽培的母种培养。
11.米粉培养基
大米粉 50g 葡萄糖 15g
　 蔗糖 15g 琼脂 20g
水 1000mL pH值 自然
12.玉米粉汁培养基
玉米粉 40g 蔗糖 10g
　　 琼脂 20g 水 1000ml
将玉米粉放入锅内，加水煮至70℃，保持60分钟，用纱布过滤，取滤汁1000mL放入锅内，先后加入琼脂和糖溶解即成。主要适用于木耳、香菇、双孢蘑菇和金针菇等母种培养。
13.马铃薯淀粉培养基
马铃薯淀粉 40g 葡萄糖 10g
　　蛋白胨 5g 磷酸二氢钾 0.5g
氯化钠 5g 琼脂 20g　　
水 1000ml
将淀粉用凉水化开，加热煮沸，再加琼脂与蛋白胨熔化后，其它成分加入搅拌即成。适于银耳芽孢萌发，又适于银耳纯菌丝培养。
14.豆芽汁培养基。
黄豆芽 200g 葡萄糖 20g
　　琼脂 20g 水 1000mL
　　 pH值 自然
将黄豆芽洗净放入1000mL水中煮20分钟，过滤取汁，补至1000mL，加入琼脂煮熔，葡萄糖放入锅内搅拌均匀即成。主要适用黑木耳，猴头、平菇等菌种培养。在缺乏马铃薯的季节，可代替PDA培养基。
15.胡萝卜琼脂培养基
胡萝卜 100g 琼脂 18g～22g　
　 水 1000mL pH值 自然
胡萝卜切条加水文火煮沸20分钟后滤汁，熔化琼脂即成。适用于培养真菌，菌丝生长优于PDA培养基。
16.葡萄糖蛋白胨奶粉培养基
葡萄糖 40g 蛋白胨 10g
　 　全脂奶粉 5g 蒸馏水 1000mL
　 pH 6.8
适合于培养冬虫夏草菌。
将上述培养基配制好后，趁热倒入大的搪瓷漏斗中，打开弹簧夹，让培养基液顺橡皮管流入试管内。装入量为试管总长的l/50装好后，随即关闭弹簧夹。然后将分装的试管，再塞上大小均匀，松紧适中的棉塞。棉塞总长约4cm～5cm，一般要求3/5留在管内，其余2/5露在管外(图4—7)。最后把塞好棉塞的试管，每7～10支扎成一把，用牛皮纸包住皮筋扎紧，放入手提式高压灭菌锅内，1.5kg／cm2灭菌20分钟，冷却达70℃左右从锅内取出，趁热摆好斜面，一般斜面长度达试管全长的1/2为宜。
最后，把斜面培养基放在30℃的条件下，空白培养1～2天，检查确无污染杂菌，便可使用。

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:34:06的发言：

(四)接种室和接种箱的操作规程
要想达到无菌操作的目的，必须严格在接种室和接种箱的操作规程。
1.接种室的使用规程
(1)在每次使用前半小时，把所需要的器材搬入缓冲室，在接种室和缓冲室用5%石炭酸溶液喷雾后，开启紫外线灯照射半小时。
(2)进入缓冲室，穿上无菌工作服、鞋、戴好口罩、工作帽，然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。
(3)将所需物品移入接种室，按一定位置摆好，检查是否齐全，并用5%石炭酸溶液重点在工作台的上方和附近的地面上喷雾，然后退回缓冲室，待几分钟后再进入接种室工作。
(4)接种前，用70%的酒精棉球擦手，然后按常规在火焰上进行各项操作。操作时动作要轻捷，尽量减少空气波动，两人操作时要配合默契。用毕的火柴杆，废纸不要扔在地上，应放在专用的瓷盆里。
(5)工作结束，及时取出接种材料，然后清理台面，将废物拿出室外，再用5%石炭酸全面喷洒，或打开紫外线灯照射半小时。
(6)接种时如遇棉塞着火，用手紧握即可熄灭，或用湿布扑灭，切勿用嘴吹灭，以免扩大火焰。如遇培养物或有菌容器打碎散落，应及时用揩布沾上5%的石炭酸溶液，收拾擦拭，再用酒精棉球擦手后才可继续操作。
2.接种箱的使用规程
(1)每次接种前用5%石炭酸在接种箱内壁和空间喷雾。
(2)用肥皂洗手后搬进接种物品，关闭箱门，开启紫外线杀菌灯照射20～30分钟。
(3)用70%酒精棉球擦手，然后伸进接种箱内操作。
(4)操作完毕要及时清扫掉落在箱内的培养物和火柴梗、棉球等杂物，并用2%来苏儿擦拭，再用5%石炭酸全面喷雾后关闭。
(五)玻璃器皿的洗涤与灭菌
为了保证制种工作的顺利进行，提高制种成品率，应首先对玻璃器皿进行严格的洗涤和灭菌。
1.洗涤时应注意的事项与方法
(1)洗涤玻璃器皿不能使用对其有腐蚀作用的化学药品，也不能使用比其硬度大的物品来擦拭，以免损伤玻璃器皿。
(2)新的玻璃器皿因附有游离碱，不能直接使用，应先在1%～2%的盐酸溶液中浸泡10个小时，再用清水冲洗干净备用。
(3)对用过的器皿应立即洗涤，久置会增加洗涤的困难。洗涤时要分类进行，以免浪费洗涤药剂和洗涤时间；对附有琼脂培养基的器皿，应先用水蒸煮融化后趁热倒出，再用清水洗涤；对沾有蜡的器皿，应先加热使之融化后擦掉，再用清水冲洗干净；对沾有焦油、树脂的器皿，可用40%氢氧化钠溶液洗涤。
(4)对清洁度要求较高的玻璃器皿，除用以上方法刷洗外，还应在洗涤液中浸泡数小时，用竹夹子取出(切勿用手取)，自来水冲洗干净，直至四壁能被水均匀湿润而无水珠时，说明油污已被除净，再用蒸馏水冲2～3次，即可烘干备用。
2.玻璃器皿的灭菌 玻璃器皿一般采用干热灭菌，若用高压蒸汽灭菌，灭菌后则要经过干燥才能使用。具体的灭菌方法前已述及，这里主要介绍常用玻璃器皿灭菌前的准备工作。
(1)培养皿 洗净后烘干或晾干，然后按每5～7套用牛皮纸或报纸包好，也可装在大饭盒或特制的盒内，即可灭菌。
(2)试管和三角瓶 洗净后烘干或晾干，灭菌前要在管口和瓶口加上棉塞，再用报纸包好。试管也可若干支扎在一起，棉塞外再包一层报纸。
(3)移液管和滴管 洗净后烘干或晾干，在口吸的一端用尖头镊子或针塞入少许脱脂棉花，以防菌体吸入口中而进入培养基内造成污染。塞好后用酒精灯火焰将露在管口外的棉花烧掉，然后用4cm～5cm宽的报纸条，以45度角螺旋形将每根移液管分别卷好，两端不可外露，再根据需要将若干支扎成一束，即可灭菌。使用时可从移液管中间拧断纸条抽取。滴管灭菌前的包装与移液管相同。
如果采用高压蒸汽锅灭菌，灭菌结束停止加热后，要立即排尽蒸汽，打开锅盖，再将锅内剩余的水排出，然后利用锅内的余热将器皿烘干。

zhaoanxjm

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以下是引用蘑菇人在2007-11-16 19:33:51的发言：

(三)接种室与接种箱的消毒灭菌
主要介绍紫外线照射、福尔马林熏蒸和石炭酸喷雾三种方法。
1.紫外线照射 在每次接种前，应将所需的器具一并移入接种室(箱)内，然后打开紫外线灯进行灭菌。如果接种室的体积较大，开灯照射要达2小时才能收到灭菌效果；如果接种箱的体积较小，则开灯只需半小时左右即可达到灭菌效果。使用时应注意，当细菌接受致死量紫外线照射后，随即给予可见光照射，其中有一部分细菌又有可能复活(称光复活现象)。为此，经紫外线消毒后的空间，最好挂上黑窗帘(接种箱罩黑布)遮光半小时，以提高杀菌效果。照射时工作人员要离开室内(避免肉眼观看紫外线灯)，以防辐射影响身体健康。
紫外线消毒的优点是：使用方便，对多数物品无损害；消毒时不必专人看管，并可作为永久性设备。其缺点是：对真菌杀伤力差，穿透能力弱。
表4-2 常用化学消毒剂的使用

名称	用途	使用方法	注意事项
福尔马林（含甲醛37%～40%）	接种室、接种箱、培养室空间消毒或物体表面杀菌	①熏蒸法：房间关闭紧密，按6～8ml/m3的用量将福尔马林置碗内，加5g高锰酸钾氧化挥发，或直接加热蒸发至干。 ②喷雾法：按1：50的比例配成水溶液喷射在物体上	①福尔马林有白色沉淀时，可加几滴硫酸溶液 ②熏蒸法房间必要预先喷湿 ③对眼睛刺激性强，应注意防护
硫磺	接种室、接种箱、培养室空间消毒或物体表面杀菌	熏蒸法：按15g/m3的用量置磁碗内，用纸片引火点燃。房间同样需密闭。	①熏蒸前喷洒水雾，以增加杀菌效果 ②注意防止金属品锈蚀
乙醇 （酒精）	皮肤、器皿、分离材料的表面消毒	配成70%～75%的溶液擦拭	易燃，使用时注意安全
苯酚 （石炭酸）	接种室、接种箱空间消毒及物体表面杀菌	①配成5%溶液在空间或物体表面上喷雾 ②3%溶液用于器械浸泡	对皮肤有腐蚀作用
来苏儿（含煤酚皂47%～53%）	手及物体表面消毒	①3%溶液浸泡器皿1小时 ②1%～2%溶液擦洗接种箱、无菌室、用具以及手的浸泡
漂白粉	床架、地板、墙壁、用具等的消毒	配成2%～5%水溶液洗刷	杀菌效力持续时间短，应随配随用
高锰酸钾	床架、器皿等表面消毒	用0.1%～0.2%水溶液刷洗或浸泡	随配随用
新洁尔灭（含季胺盐5%）	皮肤和不耐热物品的表面消毒	用0.25%的水溶液刷洗或浸泡
升汞	分离材料、非金属物品的表面杀菌	用0.1%～0.2%水溶液刷洗或浸泡	①配制时，升汞先溶于浓盐酸（每克溶于2.5ml）再用水稀释 ②剧毒，使用时注意安全
冰醋酸（冰乙酸）	空间消毒、非金属物品的表面杀菌	①喷雾：浓度0.5%，空间5ml～8ml/m3。 ②熏蒸：密闭门窗，加热30分钟	易被碱性物质中和失效

2.福尔马林熏蒸 每立方米空间一般要用8mL福尔马林原液(市售含甲醛40%的水溶液)，高锰酸钾5g。先密闭门窗，量取相应的福尔马林置于容器中，然后加入相应的高锰酸钾，操作者随即离开接种室，熏蒸50分钟即能达到消毒灭菌的目的。也可直接加热福尔马林原液，使其蒸发进行熏蒸。无论哪一种方法熏蒸，都应隔天才能接种。
福尔马林熏蒸的优点是：杀菌力强，杀菌普广，性质稳定，耐贮存，受有机物影响小。缺点是：有一定的毒性和刺激气味，且受温度影响大。
3.石炭酸喷雾 工作之前，先用2%石炭酸溶液浸湿揩布，将接种室(箱)门窗、桌、凳及地面擦拭一遍，再用5%石炭酸溶液进行喷雾，以促使空气中的微粒和杂菌附着沉降，防止微尘飞扬，同时也起杀菌作用。
石炭酸喷雾的优点是：操作简易、性质稳定。缺点是：对皮肤有一定刺激性，只能作消毒剂。
接种箱较小，也可用0.1%的升汞溶液进行喷雾，达到消毒灭菌。升汞剧毒，使用时应注意安全。