[原创]关于液体菌种的问题

gaosong427

液体菌种问题大家都探讨了很多，我想说下自己的看法。本人虽然还未正式进入食用菌行业（正在分离杏鲍菇，应该不算吧[em05]），但是对于液体深沉培养还是很有研究的（我从事于生物发酵研究），培养过细胞（动植物、人等）、霉菌、真菌（食用菌即一类大型真菌）、细菌和放线菌等等，其中除了神经细胞等一些已经不再分化的细胞外基本都可以进行液体发酵（即所说的液体菌种），其技术要点主要有以下几个方面：
一、温度：任意一种细胞都有其最适生长温度，就像我们袋载培养香菇一样，温度过高或过低都不利于它的生长发育，甚至死亡。所以我们在做液体培养时一定要选择好适宜菌体生长的温度并严格控制（一般发酵罐都带有自动控温的装置，我们只需要设定好温度即可，整个罐内的温度都会比较一致，不需要去考虑传递的问题等）。
二、pH：即我们通常说的酸碱度，中性的培养基pH为7，通过查找资料，将pH调到所培养菌体的最适生长pH，并尽量使用磷酸盐（磷酸氢二钠、磷酸二氢钠）来做为缓冲（即，使发酵液的pH在菌体生长时尽量不怎么变化）。
三、空气：食用菌是好气性菌类，氧气浓度对食用菌的生长影响很大。食用菌通过呼吸作用吸收氧气并排出二氧化碳。因此在食用菌生长过程中通压缩空气是一项必不可少的措施。一般0.2-0.5L/L*min左右，即100L的菌种罐每分钟通20-50升空气。所用空气必须要经过无菌过滤。
四、碳源：这点不像固体培养基那样，碳源一般为2-4%，尽量选择容易被利用的碳源，如葡萄糖，麦芽糖，蔗糖，蜜饯，甘油等），不推荐淀粉等易使培养基粘稠浑浊的物质。
五、氮源：一般控制在0.5%以下（氯化铵、尿素等。最好用马铃薯、麦麸等代替（可补充维生素等物质，同样尽量煮过滤汁使用，既增加了发酵液的可观察性又可以防止堵塞接种管道，量可以放大到5-10%，蛋白胨最好，但价格较高）。
六、矿质元素：铁、钴、锰、锌、钼等元素，需要甚微，一般不用考虑，尽量使用地下水、泉水或干净的河水，含量较丰富，真正的纯净水不推荐使用，除非你做这方面的课题研究。
七、维生素：维生素B2、维生素B6、维生素M、维生素PP等，在马铃薯、麦芽、酵母和米糠中有较多含量。一般不用另外配制。
八、光照、湿度：不需要了吧，食用菌菌丝基本都可以在黑暗中生长，咱又不想让它们在罐子里就出菇。本身就泡在水里嘛，哪里也没罐里的湿度大，不用考虑。
最后再提下既是重点也是最容易忽视的地方——无菌操作，一旦污染后果很严重，轻者要提前接种，降低了接种袋数，重者整罐倒掉，耽误时间，打乱了计划。我现在的污染率在0.5%以下[em15]。打字太累了，休息一下，欢迎大家补充[em01]

刀郎

又来个吹牛皮的，“本人虽然还未正式进入食用菌行业（正在分离杏鲍菇，应该不算吧），”菇还没种，何来污染率。

gaosong427

QUOTE:

以下是引用刀郎在2009-8-14 10:53:03的发言：
又来个吹牛皮的，“本人虽然还未正式进入食用菌行业（正在分离杏鲍菇，应该不算吧），”菇还没种，何来污染率。

虽然没有种菇，但我已经告诉你我是做发酵研究的。我每天都在培养酵母细菌之类的微生物，每天摇瓶都要做好几个，发酵罐一周1——3批（不允许污染），细胞还有好几瓶，所有这些操作中只要有一个杂菌进入培养基，一天之后培养基就会全部报废，实验失败，我想这些实验技能要求应该远远大于食用菌方面的吧。饭可以随便吃，话可别随便说啊朋友

gaosong427

QUOTE:

以下是引用福建老菇农在2009-8-16 15:10:25的发言：
      任何菌丝体片段都能够形成新的生长点,这是常理.液体菌种就是使菌种片段能够均匀分布在待接的培养基面上,缩短培养时间,这种做法在食用菌行业里已经普遍得到认同,现在问题是为什么会三起三落.就是我们个体经济条件下很难做到绝对无菌过滤空气用于食用菌大规模连续生产上,我们接种环境要做到万级接种环境需要相当大的投入,维持接种环境净化空气的正压是关键所在.这点道理很多人都没有搞清楚.这就是问题所在

是啊，很多已经商品化的设备虽然很好，但价格很高。但是我们也可以自己用土方法制造啊，就你所说的维持正压，我们可以用一个大些的空压机+棉花/纱布制作成简单的高效过滤器啊。

gaosong427

QUOTE:

以下是引用福建老菇农在2009-8-16 12:41:23的发言：

    看了你文章,我就知道你是有相当功底的人,中国液体菌种从1956年杨老师开始已经三起三落了,至今国内应用该技术也还在艰难前进之中,最主要的大部分人对深层发酵还处于一知半解之中,一罐没有问题,十罐也没有问题,那么是否保证每一罐都没有问题,正因为这样,所以日本在金针菇三级种还是采用固体的,而韩国人二三级种全部采用液体种.为什么?也就是稳定性问题,工厂化生产是连续性的来不得污染,特别是细菌性污染.你将空气过滤用红笔注明,说明你的熟悉程度在福建老菇农之上.此外,如何保证接种口局部环境高净化度是核心问题.有机会还得向你请教.
另外,微生物发酵和食用菌菌丝发酵还有些区别的.我在1971年才可是当新兵时,接触到灵芝深层发酵,有所感悟.

感谢福建老菇农的参与。



关于接种口局部无菌问题，我这样考虑的：将灭菌灶砌成小房间形式，进料口在外，便于放置待灭的培养基，出料口在一个洁净区内（泡沫板房，方便清理卫生。），洁净区有一传递窗连接接种箱。洁净区如果能安装高校过滤器就更好了。
在物料灭菌冷却下来后，将洁净区用消毒水擦拭一遍，放入菌种瓶，用气雾消毒剂（甲醛除外，毒性太大）消毒，然后一人进入（最好穿无菌服），将培养基和菌种经传递窗放入接种箱内，有两人或以上人员在接种箱接种。
我认为这样的优点是接种速度快，中间不需要停顿，连续操作，整个过程都在无菌环境下完成，成功率高，适合大规模生产使用。缺点是成本会高一点，不适合小规模使用。

福建老菇农

      任何菌丝体片段都能够形成新的生长点,这是常理.液体菌种就是使菌种片段能够均匀分布在待接的培养基面上,缩短培养时间,这种做法在食用菌行业里已经普遍得到认同,现在问题是为什么会三起三落.就是我们个体经济条件下很难做到绝对无菌过滤空气用于食用菌大规模连续生产上,我们接种环境要做到万级接种环境需要相当大的投入,维持接种环境净化空气的正压是关键所在.这点道理很多人都没有搞清楚.这就是问题所在

福建老菇农

    看了你文章,我就知道你是有相当功底的人,中国液体菌种从1956年杨老师开始已经三起三落了,至今国内应用该技术也还在艰难前进之中,最主要的大部分人对深层发酵还处于一知半解之中,一罐没有问题,十罐也没有问题,那么是否保证每一罐都没有问题,正因为这样,所以日本在金针菇三级种还是采用固体的,而韩国人二三级种全部采用液体种.为什么?也就是稳定性问题,工厂化生产是连续性的来不得污染,特别是细菌性污染.你将空气过滤用红笔注明,说明你的熟悉程度在福建老菇农之上.此外,如何保证接种口局部环境高净化度是核心问题.有机会还得向你请教.
另外,微生物发酵和食用菌菌丝发酵还有些区别的.我在1971年才可是当新兵时,接触到灵芝深层发酵,有所感悟.

发酵罐

液体一直是个好看不好吃的东西，只是被利益集团披了外衣，这么多年不能普及，根本不是技术和认识问题。而是我们为什么使用它，说液体好何不来个举证倒置，你说固体孬在哪里？走过这条路的大部分中途返回了。

bsq1225

QUOTE:

以下是引用发酵罐在2009-8-16 13:56:36的发言：
液体一直是个好看不好吃的东西，只是被利益集团披了外衣，这么多年不能普及，根本不是技术和认识问题。而是我们为什么使用它，说液体好何不来个举证倒置，你说固体孬在哪里？走过这条路的大部分中途返回了。

凡是都是有两面的，优缺点同时存在，只是对于生产来说，哪一个的优点更突出一点，更适合自身现阶段所配备的其他资源，就选择哪个。

shijian

QUOTE:

以下是引用福建老菇农在2009-8-16 15:10:25的发言：
      任何菌丝体片段都能够形成新的生长点,这是常理.液体菌种就是使菌种片段能够均匀分布在待接的培养基面上,缩短培养时间,这种做法在食用菌行业里已经普遍得到认同,现在问题是为什么会三起三落.就是我们个体经济条件下很难做到绝对无菌过滤空气用于食用菌大规模连续生产上,我们接种环境要做到万级接种环境需要相当大的投入,维持接种环境净化空气的正压是关键所在.这点道理很多人都没有搞清楚.这就是问题所在

     宇宙飞船的太空舱对接是个好思路，主体发酵罐放在一个与外面空气隔绝的空间，用另外一个空间管道相连，过滤空气、正压、消毒也有论坛的里高人用低廉的价格解决了，有心思能很好的结合起来，液体菌种制作成本高，易污染的弊病解决后，普及也就顺理成章了。