[原创]我做液体菌种的经验之谈如何确保发酵成成功

chencjz

     本人朋友有台液体菌种设备，去年来一直出现发酵罐污染，无法正常生产，通过一年来断断续续的研究，终于摸到些门道，基本上解决了发酵罐污染的问题，并总结了一套行之有效的方法，拿出来与大家共同分享。
    一、设备的检查
         首先对设备各个关键部位进行检查 空气过滤器 罐体是否漏气  加热棒工作是否正常 压力表是否正常等
  二、发酵室环境的要求

linlin

快点发呀 十分期待当中

chencjz

继续
不好意思，发的有些慢，非常感谢大家的关注。
这是我个人的经验，可能有些地方考虑的不够全面，希望大家能够讨论，互相提升。
转入正题
在发酵设备没有任何问题的情况下，我自己的经验，发酵出现染罐问题，特别是一天到两天的染罐问题，我总结了几个可能出问题的地方，1、过滤器过滤空气没彻底；2、并瓶时带菌或种子本身带菌；3、管路消毒没彻底；4、接种时掉进细菌。4个问题解决了，发酵一般都会成功的。另外，我们整个过程一定要有强烈的无菌概念。下面先说说环境的问题，也就时要解决问题1的方法。
  二、发酵室环境的要求
     在设计发酵室时，要远离污染源，最好在上风处，进水、电、下水一定要合理，一般大小10平米左右，下水设计一定要合理，不能残留培养基，而且要经常消毒。缓冲间最好设计一个，把气泵放在缓冲间里面，紫外灯装上，有条件的可以装个小型臭氧发生器。
     问题1、过滤器过滤空气的问题，任何一个厂家也没声明他们的产品过滤细菌可以达到100%，所以这个问题也是关键所在，有的厂家采用二级过滤，我用的时全禾的产品，只有一级加个储气罐，我个人觉得二级更保险一些。
     怎样才能使过滤的空气质量更好一些呢？这就要在缓冲间做文章了，在进气的时候，缓冲间的空气污染细菌的数目越小，过滤器的过滤压力越小，过滤出的空气越安全，洁净度高，所以这就要对缓冲间空气进行简单的处理，使其空气中细菌总数低于一定水平，在发酵过程中始终保持良好的洁净度。
     我的做法是，发酵室和缓冲间，最好用推拉门，紫外灯定时消毒，消毒液定时喷洒，凡是进出后，随手拿起消毒器进行喷洒，以保持空气的洁净度，消毒夜建议用二氧化氯，一是经常性的消毒，消毒后也没有什么味道，二是可以增氧。
    怎样才知道空气的洁净度？可以用营养琼脂做平板，进行10-15分钟的裸碟测试，来确定发酵室和缓冲间的洁净度，具体不低于多少，大家可以查下。不合格的情况下，继续消毒，直至合格。做个测试也很简单，建议是要做的，用数据说话，心里才踏实么，步步为营，逐步规范。
       另外还要干燥，因为在湿的情况下，过滤器的孔径时膨胀的，细菌很容易能过去的。 

    总而言之，关键的地方就是压缩机工作的环境一定要干净，洁净度要高，发酵室和缓冲间要定时消毒。

     这次就说这么多了，这全是我自己的经验，大家有什么好的建议可以提，有补充的可以跟帖，我不是神仙，有的地方可能考虑不到，我希望大家踊跃一些，多发言，多提问题，互相学习，不要保留，通过讨论，大家能对液体菌种有更多的了解，使复杂难做的东西规范化，流程化，形成标准的东西，以后大家做的时候，也就简单，容易成功了。

下次在再把   三、检测的方法和要求 具体阐述一下，把整个过程的检测方法及结果分析，处理方法给大家介绍下。

cangy

不错

mmkiller

期待中[em23]

chencjz

继续
  二、发酵室环境的要求
  三、检测的方法和要求
  四、并瓶过程的要求
  五、培养基配制的要求
  六、培养基灭菌要求
  七、灭好培养基检测和检测时间的要求
  八、接种时的要求（很关键，很多时候问题出在这里）
 九、发酵过程中的各种检测方法
 十、发酵终点的判断及发酵质量的检测
 十一、菌袋接种方法
先列个提纲，有空我会慢慢上传，供大家探讨。

王茂

wait~~~~

jinfen

楼主好样的，你全部介绍出来我给你置顶，让大家分享

1air3

期待中。。。。。

snile2100

谢谢分享！