卢颖颖：贵州茯苓菌种繁育研究

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　　茯苓不仅是国内的大宗药材，也是对外输出的重要商品。2014年10月13-15日，2014首届全国茯苓会议在华中农业大学国际学术交流中心隆重召开，在14日下午的“专题报告”环节，贵州省农作物品种资源研究所助理研究员卢颖颖作《贵州茯苓菌种繁育研究》报告时如此讲述到。
　　卢颖颖介绍，茯苓以干燥菌核入药，不同部位经加工分别成为白茯苓、赤茯苓、茯神、茯神木及茯苓皮等药材。贵州茯苓的产业发展主要是在与湖南靖州毗邻的黔东南地区，形成了以黎平县为中心，松茯苓产量占湖南靖州市场近一半的产区，松茯苓种植遍布黔东南州16个县市。近年来，松茯苓种植规模逐年扩大，2012年全州种植面积达3300 万平方米以上，从业人员超过1万人。黎平县的贵州森泰实业有限公司承担实施“贵州茯苓GAP规范化栽培基地”建设，编写了《茯苓复式栽培技术》，为GAP栽培基地全面推广茯苓复式栽培技术和利用松木废劣小径材、松枝高产栽培茯苓技术打下了基础。卢颖颖认为，茯苓优良菌种的选育是茯苓生产的基础和关键。茯苓的菌种选育一般采取自然选育、诱变育种及杂交育种等常规手段，目前对茯苓的菌丝形态及交配型的研究结论差异颇大，且尚无定论，但对茯苓交配型的研究在遗传和育种上具有重要意义。近年来在贵州的黔东南地区，已开始利用松木废枝丫、小径级材种植茯苓，经过几年的摸索研究，形成了茯苓复式栽培技术，以松树段木窖栽为主，树蔸栽培、松木废枝丫和小径级材栽培的多样化栽培模式共存的茯苓人工栽培技术。使茯苓栽培达到高产、稳产，解决了木材资源的浪费问题，也实现了茯苓的连片化规模化种植。
卢颖颖认为贵州茯苓菌种繁育过程中种质资源及其知识产权缺乏保护，应加快茯苓野生种质资源的调查收集、鉴定评价、保藏检索等工作，涉及有关生理、生化指标和细胞学、遗传学方面的鉴定，建立茯苓种质资源库。在育种选育上，缺乏优良生产菌株，同种异名现象较多，随意编号，造成菌种混乱，可采用分离自然菌株，从原有菌株入手进行各种遗传改造工作，推行有性繁殖。
　　目前贵州省没有育成优质高产、固定遗传性状的本地优良品种，生产所需菌种均从外地引进，因此受到食用菌市场上菌种混乱、用种随意、相互交叉、菌种制备不规范、菌种退化等一系列问题的严重影响。卢颖颖指出，在种源受制于人已成为贵州省茯苓GAP基地建设的瓶颈，对茯苓菌种进行筛选和研究是十分必要的。为此，从贵州省黎平、台江、剑河等区县选取菌株13株，包含野生菌核和人工栽培菌核；中国微生物菌种保管委提供5.78等6株；国内生产主栽川杰1号、同仁堂1号，共计23株进行试验研究。通过茯苓菌核组织分离、观察茯苓菌丝形态显微观察及荧光核染色、茯苓菌丝生长培养基配方正交筛选、优良菌株初步筛选、原种培养基粗筛、优良菌株复筛、茯苓基因组DNA的RAPD分析、优良菌株遗传稳定性分析、菌种保藏等操作。
　　卢颖颖总结此次研究筛选模型既涵盖了优质高产菌株菌丝体和菌种体外观、微生物学检验、生长速度及对基质的降解能力、栽培性状、遗传稳定性等4大项的检测和检验，优质高产菌株的筛选与筛选模型的建立将填补目前茯苓生产上没有一套简便、快捷、有效的菌种筛选方法的空白，对将来的茯苓菌种选育及菌株优选具有重要的参考价值和指导意义。试验中利用RAPD技术对10株外来菌株和贵州道地茯苓菌核分离株进行遗传分析和鉴定，RAPD分析结果显示不同来源的茯苓菌株亲缘关系非常相近，仅在某些引物的扩增物上存在较小的差异。对品种的鉴定鉴别所得聚类结果与形态和栽培性状鉴定结果完全一致。试验中采用斜面菌种保藏和甘油菌保藏两种保藏方法进行保藏，结果表明，甘油菌种保藏法和斜面菌种保藏法对茯苓菌种的保藏效果均较理想。但斜面菌种保藏时间相对较短，对设备和技术要求均较低，操作成本也较低，适合没有超低温冰柜和冻干机的单位使用；而甘油菌保藏法较适于茯苓菌种的长期保藏，特别适合茯苓母种的长期保藏。