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食用菌菌种纯度检测

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论坛元老

发表于 2012-8-23 16:57:42 |显示全部楼层
本帖最后由 myb 于 2012-8-23 16:59 编辑

不论是母种、原种还是栽培种,都应该是一种纯培养。纯度指菌种的纯化()程度.不能混有病毒、细菌、霉菌、螨虫、线虫等。除了用肉眼观察判断外.根据染杂对象不同采用以下相应的检测方法。

1病毒检测
食用菌研究的文献中有许多关于病毒的报道,但目前尚未建立一个实用的检测方法。主要借鉴植物、动物病毒检测和酶联免疫法。具体做法:提纯待检菌种的病毒,用这种病毒免疫动物(如兔子),获得抗血清,应用抗原抗体结合的特异性及酶联显色技术进行检测,如果样品中存在病毒,则有颜色显现。

2.细菌检测
取少量待检菌种(母种、原种或栽培种).按无菌操作接入营养肉汤培养液中,25~28℃振荡培养1~2d,观察培养液是否混浊。若培养液澄清,可初步判断为无细菌污染;若培养液混浊.可初步判断为为有细菌污染。为了进一步作出准确判断.可把培养液划线接种营养肉汤平板培养基,25-28℃恒温培养1~2d.观察是否有细菌菌落出现。

具体操作步骤如下:
1)对比观察细菌污染母种和正常母种的形态,对比观察原种、栽培种细菌污染和正常原种、栽培种的形态。
2)取污染和无污染的母种(原种或栽培种),分别挑一小块培养基转接到LB斜面培养基上,37度培养一天后观察。如果污染细菌,在接种块周围会长出细菌。
3)取污染和无污染的母种(原种或栽培种),分别挑一小块培养基转接到LB液体培养基上,37度、150/分钟振荡培养一天后观察。如果污染细菌,培养液浑浊。
LB培养基配方:
牛肉膏5克,蛋白胨10克,氯化钠5克,琼脂20—25克,水1000毫升,pH7.2—7.4.

3霉菌检测方法

1、菌种内部霉菌污染的检测
母种以玻璃试管为容器,一般来讲,霉菌污染用肉眼就可判断。但是由于食用菌菌丝生长很旺盛,会把霉菌掩盖,这种情况下需要分离培养观察才能确定。
原种和栽培种培养料不透明,培养料内部是否有杂菌污染肉眼看不到,可把菌种挖出,肉眼观察颜色、闻气味来初步判断。
为了进一步确定母种、原种和栽培种是否有霉菌污染,用接种针取少量待检菌种疑有霉菌污染部位.按无菌操作接种于PDA培养基中.25~28℃培养3~4d.出现白色以外色泽的菌落、非待检菌种的菌落或有异味者为霉菌污染物。必要时可用显微观察方法进行观察判断.霉菌一般是低等真菌.没有锁状联合。

2、棉塞上霉菌检测  
菌种培养后期,由于环境中的灰尘夹带着霉菌孢子沉积在菌种的棉花塞上,若环境湿度高,这些霉菌孢子就在棉塞上萌发、生长,并在棉花塞上形成孢子,当菌种受到振动,这些孢子就会掉落到菌种上。检测方法如下:                                                
1)对比观察两只母种棉花塞的外观。
2)用酒精灯把露在试管口(或瓶口)外的棉花塞烧弃.用消毒过的镊子夹出剩余的棉塞.用接种针粘取棉塞底部.转入新鲜 PDA斜面培养基.25~28℃培养3~4d后观察是否长出霉菌。



四、螨虫和线虫检测 方法                                                           
首先用肉眼观察菌种,查看菌丝是否有被“蚕食”的现象。如果有,用放大镜进行观察,是否有螨虫或线虫存。若尚不能确定,用接种针挑取取少许待检菌种的菌丝于载玻片上水滴中.撕散菌丝.盖上盖玻片.用lO倍或40倍物镜观察.检查是否有螨虫或线虫存在。


最后阐述一下菌种活力检测
活力指菌种的生活适应能力和抗逆能力.反映菌种的活力,如菌丝形态、发菌程度、色素、分泌物、菌丝自溶、拮抗线、原基、脱壁等。这些指标都可用肉眼来判断。还可以通过以下试验来检查菌种的活力。
1)取待检菌种.按无菌操作要求.用接种铲或接种耙铲弃菌种表面(或斜面)一薄层,塞回棉花塞.放于适宜的温度下培养.观察其萌发出新菌丝的能力。
2)取待检菌种.按无菌操作要求.接入下一级菌种培养基.适宜的温度下培养.观察其萌发出新菌丝及吃料的能力。

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发表于 2012-8-23 17:15:00 |显示全部楼层
顶!我是新手 还在学习中

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佳明  能不能不做广告。  发表于 2012-8-24 09:20
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论坛元老

发表于 2012-8-23 19:41:15 |显示全部楼层
好文章,读后如六月喝到雪水!
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金牌会员

发表于 2012-8-23 21:12:07 |显示全部楼层
真好!真好!
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论坛元老

发表于 2012-11-28 09:46:14 |显示全部楼层
菌种检测很简单,大可不必那么复杂,说的挺玄乎!食用菌菌种的检测不宜借鉴其他细菌病毒检测方法。对虫害有一只五到十倍的放大镜即可,对照书上的图片即可准确分辨出。食用菌生产过程中的霉菌都是在培养基和菌丝表面,中间是没有的。目测即可,眼花了,近视了,戴上眼镜就中。霉菌是氮氧化合物,大可不必大惊小怪。到河南鲁山华光食用菌化学经营部培训防治霉菌很简单,登录菌哥博客可了解详情,询13619828203热线热情答复

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不大不小菇  霉菌是氮氧化合物?任岛峰先生真的敢忽悠,厚,真的厚。  发表于 2012-11-28 10:18
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