食用菌菌种的种性检验（一）

myb

一、形态学检测

1.菌落特征观察

根据不同的食用菌种类、选择适合的培养基，制备斜面和平板培养基用。

取待检菌种（母种、原种或栽培种），挑取一小块于斜面培养基上，适温下培养，袋长满管时，转接斜面培养基上，进行培养之满管，再接种于平板培养基上，适温培养之菌落直径为培养皿直径的2/3时，观察菌落形态。如果是为了鉴别母种、原种、栽培种，可分别取样，同时进行菌落特征观察试验，对比三者的菌落形态是否一样。

不同品种，其菌落特征通常有一定的差异，尤其是菌种种性出现退化，会出现生长速度变慢，气生菌丝少。

对比观察正常菌种与退化菌种的菌落。食用菌菌种退化是指菌种在生长发育过程中发生变异或生长状况下降，丧失原来的特征，而在菌种生长阶段表现异常。如母种菌落形态不正常、菌丝倒伏、生长势变弱、长速变慢和长相不均一、产生色素等。如果培养期间出现色素，表明菌种退化严重。如黑木耳和香菇在母种培养期间出现明显色素，均不易形成子实体。正常母种的特征：生长整齐，有力、边缘圆滑、丰满；色泽一致、均匀、正常分泌色素；生长态势良好，速度正常；菌丝旺盛、健壮、无拮抗。

2.拮抗试验

不同食用菌、不同品种菌丝之间通常会相互抑制，菌落间出现抑制线。具体方法是：

（1）取试验菌种，挑取一小块于斜面培养基上，适温下培养，袋长满管时转接斜面培养基上，进行培养之满管。

（2）取活化后的菌种，不同品种个挑取一小块相距2—3厘米接种于PDA平板培养基上，25度培养10天。

（3）对比观察菌落交界处是否产生拮抗带，拮抗带的宽窄，深浅及其他反应。

如果交接处出现明显的线状特征（有的食用菌出现栅栏状，有的出现不长菌丝的区带），即为拮抗，表明两个待检品种是不同的菌株；如果没有表现出拮抗，两个样品可能是同一样菌株（特殊情况不好判断）。

3.菌丝显微观察

根据不同的食用菌种类，选择适合的培养基，取待检菌种，挑取一小块于斜面培养基上，适温下，待长满管时，转接到斜面培养基上，进行培养至满管。取活化后的菌种，转接到斜面培养基上，25度培养7天；在载玻片上滴一滴无菌水，用解剖针从试管内挑取少许菌丝于水滴上，撕破菌丝，盖上盖玻片，先用10倍物镜观察菌丝的细微结构，尤其是判断是否有锁状联合，观察锁状联合的形态特征，测量菌丝细胞宽度。

大多数食用菌是异宗结合的菌类，单核菌丝（或同核菌丝、初生菌丝）不能出菇，没有锁状联合，而异核菌丝则相反。锁状联合(clampconnection)：担子菌的次生菌丝每一个细胞都有二个核，其中一个核来自母本，一个来自父本，当双核细胞进行细胞分裂时，在二个核之间处生一个短小弯磨曲的分枝，核移动，在二核之间生出一个突起如钩状，一个核进入钩一个留在菌丝钩中保留一个核，一个往后移，菌丝中二个核一往前一个往后移钩状突起向下弯曲与细胞壁接触溶化，分枝基部生分隔膜（分隔中间有孔道），在原分支外形成一隔膜，产生一个新细胞双核体，在分隔处保留一个桥形结构称锁状联合。这一过程保证了双核菌丝在进行细胞分裂时，每节（每个细胞）都能含有两个异质（遗传型不同）的核，为进行有性生殖，通过核配形成担子打下基础。锁状联合是双核菌丝的鉴定标准，凡是产生锁状联合的菌丝均可断定为双核。锁状联合也是担子菌亚门的明显特征之一。

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weijia158

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既是红颜1

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