[原创] 【随缘病虫害防治之四】菌种生产中的注意事项及解决方法

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        一、  一级种制作过程中的注意事项

    （1）制作或盛装培养基的器皿，不能使用铁锅或铜锅，以免铁锈或铜锈混入培养基中，使铁或铜含量过高。一般使用搪瓷缸或铝锅。

   （2）制成的培养基，在使用前应做无菌检查，方法是将其置于27℃左右的恒温箱内培养24小时，证明无菌后方可使用。

   （3）制备好的培养基，应及时用完，不宜久存，以免降低其营养价值或成分上发生变化。

   （4）制备过程中，一定要严格遵守无菌操作规程，并标好标签，注明菌种名称。接种日期和转管次数，尤其在同一时间几种不同的菌种接种时，一定要严防混杂。

    （5）一级种转管的次数不能过多，一般以5-6次为好，不能超过10次，否则，由于移植时所造成的机械损失，以及培养条件的变化，会削弱菌丝活力，导致遗传性状变异，降低出菇率。因此，引进或育成的菌种在第一次转管时，可较多数量扩转，并以不同方法保藏，按计划使用。

    （6）切勿使用无标记或判断不准的菌种，以免使用后造成损失。

    （7）不要使用培养基已干缩或老化的一级种，以免影响菌种成活率或导致生产性状的退化。长期保藏的菌种，用前应放在恒温箱中活化培养，并逐步提高培养温度，活化培养时间一般为1-3天。如在冰箱中保存时间超过3个月，最好转管培养一次再用，以提高接种成功率和萌发速度。

    （8）启用保藏的一级种，应认真检查是否有污染现象。如试管斜面上呈现明显的黑色、绿色、黄色等菌落，则説明已遭受霉菌的污染；将试管迎亮光观察，如果在气生菌丝下面有黄褐色圆点或不规则斑块，説明已遭细菌污染；被污染的菌种绝对不能用于扩大生长。

     （9）接种块不萌发或不吃料的原因：菌种在0℃甚至以下温度保藏，菌丝已冻死或失去活力；菌龄过老，生活力衰弱；接种操作时，母种块被接种铲或酒精灯火焰烫死；母种块没有贴紧原种培养基；菌种萌发后缺乏营养死亡；接种块太薄太小干燥而死；母种培养基过干，菌丝无法活化或原种培养料偏干，菌丝无法吃料生长；培养料配比不当，或菌袋内有氨气或其它不良气体，致使酸碱度不宜；菌袋接种前冷却不彻底，或培养温度过高等。

        二、   二、三级菌种制作中的注意事项

    （1）培养基含水量  食用菌菌丝体的生长发育与培养基含水量有关，只有含水量适宜，菌丝生长才旺盛健壮，通常要求培养基含水量在60%-65%之间，即手握紧培养料，以手指缝中有水外渗往下滴1-2滴为宜，没有水渗为过干，有水滴连续淌下为过湿，过干或过湿均会对菌丝生长不利。

   （2）培养基的PH值  一般食用菌正常生长发育需要一定范围的PH值，木生菌要求偏酸性，即PH值为4-6，粪草菌要求中性或偏碱性，即PH值为7.0-7.2。由于我们灭菌时常使培养基的PH值下降0.2-0.4。因此，灭菌前的PH值应比指定的略高一些。

   （3）装好袋的培养料应及时灭菌  培养料装完袋后应立即上锅灭菌，特别是在高温季节，严禁把培养料放置过夜，以免由于微生物的作用而导致培养基酸败，造成杂菌的滋生，危害菌丝生长。

   （4）菌种长满菌袋（瓶）后，应及时使用  一般来説，二级菌种满瓶后7-8天，最适合扩转三级种，三级种满袋后7-15天最适宜播种。如果不及时使用，就很容易老化而影响菌丝的生长。

      三、菌种萌发不正常及发菌不良的原因与解决方法

    （一）菌种萌发不正常  主要表现为两种情况：一是不萌发或萌发缓慢；二是萌发出的菌丝纤细无力，扩展缓慢。我们分析的思路应为：培养温度---培养基含水量---培养基原料质量---灭菌规程及效果---母种。对于菌种不萌发，或萌发缓慢，或扩展缓慢来説，这几个方面的因素必有其一，甚至可能是多种因素在共同影响。

     1：培养温度过高：   造成菌种不萌发、萌发迟缓、生长迟缓。

     2：含水量过低：  尽管拌料时加水量充足，但由于拌料不均匀，造成培养基含水量的差异，含水量过低的菌种常干枯而死，发生这种情况，及早补水尚可挽救。

     3：培养料原料霉变：  正处霉变期的原料中有大量的有害物质，这些物质耐热性极强，在高温下不易分解变性，甚至在高温高压下仍保持其毒性，接种后菌种不萌发。

     4：灭菌不彻底： 培养基内留有大量细菌，而不是真菌。培养基中残留和继续繁殖增加的细菌，多数情况下无肉眼可见的菌落，有时在含水量过大的袋壁上，在培养基的颗粒间可见到灰白色的菌膜。这一原因可通过培养基的分离培养得到证实。

     5：菌种菌龄过长：菌种生产者应使用菌龄适当的母种，多种食用菌母种使用最佳菌龄都在长满斜面后1-5天。在计划周密的情况下，母种和原种生产的紧密衔接是完全可行的。如母种长满斜面后一周内不能使用，要及早置于4-6℃下保存。

   （二）发菌不良   发菌不良的表现多种多样，常见的有生长缓慢；生长过快但菌丝纤细稀疏，生长不均匀，菌丝不饱满，色泽灰暗等。造成发菌不良的原因主要有：

      1：培养基酸碱度不适  可将发菌不良的菌袋的培养基挖出，用PH试纸测试。

      2：原料中混有毒害物质  如松、杉、柏、樟、桉等树种的木屑，原料有过霉变，有霉菌毒素。

      3：灭菌不彻底  培养基中生长有肉眼看不见的细菌等。

      4： 装料松紧不妥当  装料过紧，水分过少、透气性过差。

      5：温度和湿度过高  培养室温度和湿度过高，空气流通交换不够。

      6：培养基含水量过大，装得过紧 这种情况下，往往菌丝长至菌袋中下部后，菌丝生长开始变缓，甚至不再生长。

     四、杂菌污染的原因及其综合防治

   在正常情况下，原种、栽培种或栽培袋的污染率在10%以下，各个环节和操作规范者，其污染率只有1%-5%。如果超出这个范围，则应该认真查找原因并施以控制措施。

    （一）灭菌不彻底  这一原因导致污染发生的特点是污染率高，发生的早，污染出现的部位不规则，培养料的上中下各部均出现杂菌。这种污染常在培养3-5天后即可出现。影响灭菌效果的主要因素有：

      1：培养料的原料性质  不同材料导热性不同，微生物基数不同，灭菌所需时间也不同。因此，灭菌时要根据培养料的不同来掌握灭菌的时间。

      从培养料原料的营养成分来讲，糖、脂肪、和蛋白质含量越高，传热性越差，对微生物有一定的保护作用，灭菌时间就相对要长一些。

      从培养料的自然微生物基数上看，微生物基数越高，灭菌需要的时间越长。

     2：培养料的含水量和均匀度  水的传热导性能较木屑、粪草、谷粒等的固体培养基要强得多，如果培养料配制时预湿均匀，吸透水分，含水量适宜，灭菌过程中达到灭菌温度需时短，灭菌就容易彻底。

     3：容器  菌种玻璃瓶较塑料袋热传导要慢一些，在使用相同的培养料、相同的灭菌方法时瓶装菌种要比袋装菌种灭菌时间长一些。

     4：灭菌方法 相比较而言，高压灭菌可用于各种培养料的灭菌，而常压灭菌对于灭菌难度较大的粪草种和谷粒种或麦粒种要达到完全灭菌效果就很不容易。目前国外的专业菌种厂已采用超高温瞬时灭菌技术。高压灭菌的关键是要排放干净冷空气。而常压灭菌时如锅小、锅口小、水少、蒸汽不足、火力不足、常是常压灭菌不彻底的主要原因。

     5：灭菌容量和堆放方式  以蒸汽锅炉送入蒸汽的高压灭菌锅，要注意锅炉汽化量与锅体容积相匹配，自带蒸汽发生器的高压灭菌锅，以每次容量200-500瓶（每瓶750毫升）为宜。这样，可使培养料升温快而均匀，培养料中自带微生物繁殖时间短，灭菌效果更好。灭菌时应随容量的增大而延长灭菌时间。

     灭菌锅内菌袋的堆放方式对灭菌效果影响显著，如袋料菌种，受热后会变软，如装料不紧，叠压堆放，极易把升温前留有的间隙充满，不利于水蒸气的流通和升温，就会影响灭菌效果。袋料菌种摆放时，应以叠放3-4层为度，不可无限叠压，锅大时要使用铁筐。

    （二）封盖不严  主要出现在用罐头瓶做容器的菌种中，在用塑料袋作容器的折角处也时有发生，聚丙烯菌袋经过高温灭菌后比较脆，在搬运过程中遇到摩擦，紧贴袋口处或折角处极易磨破，形成肉眼不易看见的沙眼。

     （三）接种物带有杂菌  如果接种物本身就已被污染，再扩大到新的培养料上必然会出现成批的污染。这种污染的特点是杂菌从菌种块上长出，污染的杂菌种类比较一致，且出现早，接种后3-5天就可以用肉眼鉴别。

     （四）菌种厂设备设施过于简陋引起灭菌后无菌状态的改变

本来经过灭菌后的菌袋已经达到了无菌状态，但由于灭菌后的冷却和接种环境达不到洁净无菌，特别是那些简易菌种厂和在家里自制菌种的菇农，其生产设备和生产环节分散，又往往忽略场地的环境卫生，忽视冷却场地的洁净度，使本已无菌的菌袋在冷却过程中被污染。在冷却过程中，随着温度的降低，袋内气压降低，冷却室如果灰尘过多，杂菌孢子基数过大，杂菌孢子就很自然的落到了菌袋的表面，而且随内外气压的动态平衡向袋内移动，当棉塞受潮后就更容易先在棉塞上定植，或等待接种操作时随手的碰触而落进袋内。当菌袋外附有较多的灰尘和杂菌孢子时，就会成为接种操作的污染源。

    （五）接种操作的污染  其发生特点是分散出现在接种口处，比菌种带菌和灭菌不彻底造成的污染发生稍晚，一般接种后7天左右出现症状。接种操作的污染源主要是接种室空气和菌袋冷却中附在表面的杂菌，有的接种操作人员自身洁净度不良，也是很重要的污染源，违反接种无菌操作规程等都是接种操作的污染原因。要避免或减少接种操作的污染需注意以下环节：

       1：不让棉塞打湿  灭菌摆放时，切勿让袋口棉塞贴近锅壁。当棉塞向上摆放时，要用牛皮纸包扎。菌袋灭菌结束时，要自然冷却，不可强制冷却。当冷却至一定程度后在掀开锅盖，让锅内的余热把棉塞的水汽蒸发。

       2：洁净冷却  规范化的菌种厂，其冷却室是高度无菌的，空气中不可能有可见的尘土，灭菌后的菌袋不能直接放在有尘土的地面上冷却。冷却室使用前可用烟雾消毒剂或金星消毒液进行空间消毒。

      3：接种室和接种箱使用前必须严格消毒   接种室墙壁要光滑、地面要洁净、封闭要严密。

      4：接种过程要严格按照无菌操作要求进行操作  尽量少走动，少搬动，不説话、尽量小动作、快动作，以减少空气震动和流动，减少污染。

      5：在火焰上方接种  实际上，无菌室内相对无菌的空间只在酒精灯火焰周围很小的范围内。因此，接种操作，包括开盖、取种、接种。盖盖，都应在这个绝对无菌的小区内完成，不可偏离。接种人员要密切配合。

      6：拔出棉塞要缓劲  拔棉塞时，不可用力直线上拔，而应旋转式缓劲拔出，以免造成袋内负压，外界空气突然进入而带入杂菌。

      7：湿塞换干塞   灭菌前，可将一些备用棉塞用塑料袋包好，放入灭菌锅同菌袋一同灭菌，当接种时发现菌袋棉塞被蒸汽打湿时，要换上这些新棉塞。

     8：接种前要做好一切准备工作  力争一次接种不间断，一气呵成。   
    
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