请教超净工作台细菌污染问题

wangzhou1976

我是在超净工作台上接的种，可也竟然给细菌污染了，培养箱里培养一周后，20支试管培养基上均有脓状斑，真郁闷，难道是外植体上带菌了么？我是在平菇内部取得菌肉组织啊，要不是超净工作台灭菌不彻底，孔隙里仍有灰尘细菌么？哪位高手给指点一下啊！谢谢。
另外，我的试管培养基是在手提式高压锅里灭的菌，未见霉菌污染。超净工作台是刚购买的，接种前用酒精擦洗了一遍，开风半小时后接的种。
       一个新手

bluesun198419

赞同楼上的观点

lsy6560483

QUOTE:

以下是引用蕈苑在2009-4-28 18:49:41的发言：

试管内有冷凝水，组培块接触冷凝水后便会产生细菌污染

不会的，物种不会凭空产生，它只会繁衍。如果组织块中无细菌，灭菌彻底的试管中的冷凝水更不会有细菌，把无菌的组织块接入无菌的试管中，绝不会凭空产生细菌。

天下文章一般抄

QUOTE:

以下是引用wangzhou1976在2009-4-28 16:59:30的发言：

我是在超净工作台上接的种，可也竟然给细菌污染了，培养箱里培养一周后，20支试管培养基上均有脓状斑，真郁闷，难道是外植体上带菌了么？我是在平菇内部取得菌肉组织啊，要不是超净工作台灭菌不彻底，孔隙里仍有灰尘细菌么？哪位高手给指点一下啊！谢谢。
另外，我的试管培养基是在手提式高压锅里灭的菌，未见霉菌污染。超净工作台是刚购买的，接种前用酒精擦洗了一遍，开风半小时后接的种。
       一个新手
根据你介绍的状况其实什么硬件问题可能都没有！关键可能就是所采的“菇体”含水量太大了！

菇民520

我也认为是,菇太湿

平菇叶

看楼主的叙述，猜测自己一定能分析出原因。
下次再做的时候留几只试管不要接种，培养几天用来测试灭菌效果。

听说，熟练操作者即使在野外自然状态下组织分离成功率也是很高的

田鸿

试管长细菌不长霉菌与超净工作台无关。如果是试管转管，出现细菌污染，则是接种操作问题；如果是做组织分离出现细菌感染，则有可能（1）采的种菇已经在变软，腐烂；（2）组织块切取时刀具、接种铲或接种锄、镊子等工具消毒不好，造成组织块污染细菌。

发酵罐

楼主说的很明白，20只试管均有脓状斑，我看培养基灭菌有关。

王茂

QUOTE:

以下是引用wangzhou1976在2009-4-28 16:59:30的发言：

我是在超净工作台上接的种，可也竟然给细菌污染了，培养箱里培养一周后，20支试管培养基上均有脓状斑，真郁闷，难道是外植体上带菌了么？我是在平菇内部取得菌肉组织啊，要不是超净工作台灭菌不彻底，孔隙里仍有灰尘细菌么？哪位高手给指点一下啊！谢谢。
另外，我的试管培养基是在手提式高压锅里灭的菌，未见霉菌污染。超净工作台是刚购买的，接种前用酒精擦洗了一遍，开风半小时后接的种。
       一个新手

很正常的失败。这是新手常常遇到的问题。主要还是操作的手法出了问题。
我把自己的操作习惯说一下：
1、把菇，酒精灯，接种铲，酒精棉球，打火机，试管架放进超净工作台；
2、打开紫外灯，消毒半小时；
3、关闭紫外灯，打开操作灯，取下手上戴的东西，肥皂洗手；
4、坐好，手申进超净工作台，用酒精擦洗手；
5、点燃酒精灯，用酒精灯烤接种铲，用右手小指和无名指夹下棉塞，并一直夹住，大拇指，食指，中指拿住接种铲，左手拿试管，灼烧试管口，然后放在试管架上，试管口位于酒精灯火焰上方，距离自己把握，试管内冷却接种铲；
6、用手撕开子实体，用接种铲挑取中心子实体肉质，快速放进试管琼脂培养基上，抽出接种铲，在酒精灯上塞上棉塞，注意防燃。
7、完成一支。重复5、6再继续搞就行了。

tianyu

  培养基灭菌不彻底的可能性最大。