食用菌母种（一级种）培养基的调制及其组方

bluesun198419

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食用菌母种（一级种）培养基的调制及其组方范例
                  
培养基是食用菌生长的“土壤”，是其生命活动的“食粮”。一个好的培养基必须具备三个条件：
第一， 含有被培养菌株生长所需的物质（水份；营养；适宜的酸碱度）；
第二， 具有强烈的生长反应；
第三， 经过严格的灭菌处理，保持无菌状态。
生产，实验中常用的培养基有：琼脂培养基；固体培养基；液体培养基。这里主要介绍常用的琼脂培养基（母种培养基）及其调制技术。

一、母种培养基材料的基本常识和调制技术

1、琼脂的性质和使用方法：

琼脂是制备微生物培养基的凝固剂。它是从海生红藻（主要是石花菜）中提炼的冻胶状物质，98℃时溶化，45℃时又恢复成凝胶状。琼脂的主要成分是半乳糖及少量葡萄糖醛酸，因此不能成为真菌的碳源营养。所以在没有添加营养物质的水琼脂培养基上菌丝不能生长！琼脂的主要作用在于使培养基呈凝胶状态，起支持菌丝生长的作用。每升培养基内琼脂的含量一般为17克～22克，在自然气温较高，酸度较低和某些特殊情况下，琼脂的用量可以增加到25克／升。超过这一水平培养基容易炸裂并对菌丝生长不利！

2、马铃薯淀粉的制取方法：

马铃薯淀粉是制备培养基的主要材料。在生产或者实验中应用马铃薯淀粉有两种方法：一种方法是将新马铃薯（土豆）洗净并挖去芽眼，削除表皮之后称重，取马铃薯200克，切成丝，在1000毫升水中煮沸15分钟～30分钟，稍冷却，后用四层纱布过滤，取滤清液并补充水分足1000毫升！这种利用马铃薯淀粉的方法应根据需要在制种时现制现用。
另外一种方法是将去皮去芽眼的马铃薯打成细浆，盛在容器中加水调匀并用四层纱布过滤2～3次，将滤液自然沉淀，沉淀结束后除去上清夜，然后，将得到的淀粉薄摊于玻璃板上干燥。最终将充分干燥的淀粉密封在容器中，这样便可在今后需要制种时随时取用。制种时称淀粉20克，加水1000毫升即可。用这种方法制取的马铃薯淀粉的营养成分几乎不受破坏。

3、麦芽汁的制取方法：

取大麦1千克在温水中浸泡一昼夜滤出，平铺于盘中，上盖多层湿纱布保湿，保温，然后，放置在24℃条件下培养，待大部分麦芽长出并长达麦粒自身长度时清洗，沥净，捣碎，过滤，沉淀后取其上清夜。1千克大麦发芽所制备的上清夜可配2000～3000毫升培养基。新鲜的麦芽汁应现制现用，多余部分要冰箱保存。
发好的麦芽用不完也可晒干保存，需要时，称取麦芽200克捣碎加水1000毫升。
不论是干麦芽配制的麦芽汁还是鲜麦芽配制的麦芽汁都需要在80℃～82℃的温度条件下糖化2～3小时，并测定糖化完全时煮沸过滤备用。

测定糖化的方法：取糖化液0.5毫升，加碘滴，如无兰色出现即说明糖化完成。

4、酵母汁的制取方法：

取干酵母7～10克，加水1000毫升，煮沸，静置澄清，取上清液，经过滤后，可代替酵母膏使用。每1000毫升培养基加酵母汁10毫升。
也可把干酵母碾散，加水适量，在53℃条件下，保温两昼夜，酵母自行溶解，得酵母自溶液。用时加水稀释到1％（即100毫升水内含干酵母1克），再煮沸10～15分钟，冷却，调PH到4.5静置沉淀，取上清液，再调PH到7～7.4后灭菌。每升加酵母自溶液5～10毫升或酌情加量。


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5、天然培养基或半合成培养基的调制：

调制天然培养基或者半合成培养基时要因材料不同而工艺不同。一般来说，当选用材料是谷物，植物的茎块根皮等，都应先制浸出液。谷物要在清水中淘洗干净；马铃薯，红薯，芋头，葫罗卜等茎块，应先洗静，削皮，后称重 ；木质材料应选幼嫩枝条或边材并加以粉碎或切成小块；浆果应捣成泥糊，称重后补入适量的水，然后煮沸，改小火煮10～15分钟（谷物的时间应延长到1～2小时），趁热用多层纱布过滤，补足水分，加入琼脂，继续加温直至琼脂溶化后加入其它成分，糖类在停火后加入并充分搅溶。这时应趁热分装试管或者是三角瓶，培养皿等容器。
米粉，玉米粉等淀粉类材料，在称重后，加入少量冷水调成浆糊状，再加入其余的水，然后将其煮沸并用四层纱布过滤，取滤汁再加热并按前述方法加入其它成分，待各种材料充分熔融后趁热分装试管或其它容器。
可溶性淀粉，糊精，马铃薯淀粉在称重后加入少许冷水调成浆状，再加入其余的水，煮沸后加入琼脂，再按前述方法加入其它成分，充分溶解后分装容器。
腐殖土，马厩肥，堆肥的浸出液，按前述方法煮沸之后，将滤液装在烧杯内，放4℃以下低温处静置过夜，然后吸取上清液，补足水分，再依次加入琼脂，无机盐和糖类。

6、合成培养基的调制，分装：

计量所需的水（一般500毫升或1000毫升），加入相应比例的琼脂（一般是10克或20克），加热到琼脂溶化，加入无机盐和糖类，上述材料充分熔融后停火并加入维生素类成分。
以上琼脂培养基配制调溶后的分装可采用配有止水的玻璃漏斗。也可以用配有止水夹的医用胶管，胶管一头插进培养基容器（铝锅）的底部，另一头安装滴管并弯垂在容器外使之形成虹吸管，一但吸通，成流，便可用止水控制分装量。特别注意分装量很重要，尤其是分装试管时，因为灌装量直接决定着斜面的长度（斜面的长度是试管长度的3／5为好），同时还要特别注意培养基不可以污染试管口部。装好的试管要及时塞上棉塞，棉塞的松紧要适度，一般手提棉塞稍抖动而试管不掉即可。装好培养基的试管按7支一把，有棉塞的一头向上并用厚纸包裹绑扎，小心轻轻放在灭菌锅里进入灭菌程序。灭菌要求在排尽冷气（排气不可过猛）后重新升温，当再次上压到1个压力后计时0.5～1小时。同时还要特别注意培养基不可以污染试管口。

二、培养基的分类和例方：

因培养基的使用目的不同，通常习惯于将装入试管放成斜面的称为“斜面琼脂培养基”。多用于生产菌珠的培养，也用于扩繁和分离（孢子分离，组织分离）；
把装入三角瓶和培养皿的称为：“平板琼脂培养基”，多用于菌种分离，环境中害菌的测定；
把装入试管，但是不做成斜面的称为“高层培养基”，多用于菌种保藏。
另外，从食用菌不同品种的生理生态特点我们还可以知道，它们之间的营养生理和生态习性相差甚远，有时同一品种的不同菌株对培养基的营养构成，PH值的适应范围等也不尽相同。所以，为使某一食用菌菌株生长发育良好，首要的问题是为该菌株设计一个最适宜的，最可口的“食品”——培养基。
为此，我们将累积多年的经验，资料及部分常用或者具有某种特殊用途的琼脂培养基范例总结整理成册，诚望能对菇友有所补益！

（一） 天然培养基例方

1、麦芽汁琼脂培养基（BA）

麦芽汁（10～15波美度）1000毫升；琼脂20克；PH自然。

注：适用蘑菇或其它菇类，生长反应一般。

2、燕麦片浸汁培养基

燕麦片100克；琼脂17克；水1000毫升；PH自然。

注：适用菇类保藏。

3、小麦煮汁培养基

小麦1000克（煮汁）； 蔗糖20克； 磷酸二氢钾（KH2PO4）0.5克；水补足1000毫升；PH自然。

注：适用平菇母种。

4、杏汁金针菇培养基

干杏40～50克（煮汁）；琼脂20克；水补足1000毫升；PH自然。

5、苹果煮汁草菇培养基

苹果干100克（煮汁）；蔗糖20克；蛋白胨2克；琼脂20克；水补足1000毫升；PH7～7.2（灭菌前）。


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6、洋葱酱油培养基

洋葱500克；酿制酱油20毫升；蔗糖50克；琼脂20克；水980毫升；PH自然。

注：洋葱切碎水煮沸30分钟取滤液配入。

（二） 半合成培养基例方

1、马铃薯，葡萄糖，琼脂培养基（PDA）

马铃薯200克；葡萄糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：是基本培养基之一，简称PDA 培养基。广泛适用于培养各种菇类，但是，此配方不适合草菇，猴头菇菌丝的生长。

2、马铃薯，蔗糖，琼脂培养基（PSA）

马铃薯200克；蔗糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：本方与PDA培养基生长反应基本相同，但是培养平菇时，菌丝长势还不及PDA好。

3、马铃薯综合培养基

马铃薯200克；葡萄糖20克；磷酸二氢钾3克；硫酸镁1.5克；维生素B1  5～10克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合草菇，灵芝，猴头，茯苓，金针菇等的培养。其中的B1可用酵母膏0.5～1克代替。如果在配方中另外加入蛋白胨20克，猴头菌丝会生长的更加旺盛并延缓老化。

4、马铃薯，木屑煮汁培养基

马铃薯200克；木屑（皮栎）20克；蔗糖20克；麦芽糖10克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合香菇，木耳，猴头，灵芝，金针菇和竹荪。对蘑菇，平菇菌丝体的培养不太理想。

5、马铃薯，黄豆粉煮汁培养基

马铃薯200克；黄豆粉20克；蔗糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合香菇，木耳，灵芝，金针菇，蜜环菌和竹荪。蘑菇菌丝生长不良。

6、胡萝卜，葡萄糖琼脂培养基（CDA）

胡萝卜100克；葡萄糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：与PDA培养基基本相同。

7、黄豆芽浸汁培养基

黄豆芽250克；葡萄糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：与PDA培养基基本相同。

8、木薯粉浸汁培养基

木薯干粉25克；葡萄糖20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：与PDA培养基基本相同。

（三） 合成培养基例方

1、完全培养基（CM）

蛋白胨2克；葡萄糖20克；磷酸二氢钾0.46克；磷酸氢二钾1克；硫酸镁0.5克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适用菇类母种和保藏，也适合香菇杂交，在组份中另外再加入酵母膏0.5～1克，可使菌丝更旺盛。

2、麦芽膏琼脂培养基（MA）

麦芽膏20克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合多种伞菌，多孔菌，胶质菌母种培养基。有时麦芽汁，琼脂的量也可加到25克。

3、木腐菌标准培养基

麦芽浸膏20～25克；蛋白胨10克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

4、麦芽糖，葡萄糖，琼脂培养基（MDA）

麦芽糖20克；葡萄糖20克；蛋白胨1克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合多数菇类母种需要。

5、蛋白胨，麦芽膏，琼脂培养基

蛋白胨0.3克；麦芽膏50克；蔗糖30克；磷酸二氢钾0.3克；磷酸氢二钾0.3克；硫酸镁0.3克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。

注：适合多数菇类母种需要，对木腐菌尤其适合。

6、TY一号培养基

麦芽膏10克；蛋白胨1.5克；酵母膏0.5克；麦芽糖5克；磷酸二氢钾0.25克；硫酸镁0.5克；硫酸钙0.5克；琼脂30克；水1000毫升；PH自然。

注：适合大多数木生伞菌。

7、TY二号培养基

麦芽膏15克；磷酸铵1克；硫酸镁0.1克；硫酸铁0.1克；硝酸铵1克；硫酸锰0.05克；琼脂25克；水1000毫升；PH自然。

注：适合大多数木生伞菌。

8、TY三号培养基

酵母浸膏15克；蔗糖10～40克；磷酸二氢钾1克；麦芽浸膏15克；硫酸钠2克；氯化钾0.5克；硫酸镁0.05克；硫酸铁0.01克；琼脂20克；水1000毫升；PH自然。
注：适合大多数木生伞菌。


续完——黄若愚（yugongxunjun@163.com）