周天华：天麻微卫星分子标记为天麻的良种选育与用药安...

独孤天下

　　“不同种质植物之间的微卫星DNA片段会产生较为明显的差异性，可以用于区分不同种或者同种不同个体；多态性高，特异性强，区分度好，开发难度大；目前DNA指纹鉴定图谱技术已经广泛的应用于中药鉴定领域。”11月24日下午，在2018第六届全国天麻会议“天麻‘两菌一种’发展高峰论坛”环节，陕西理工大学周天华博士在报告中讲到。他向与会代表分享了天麻种质资源的DNA指纹图谱研究。
　　天麻为兰科天麻属植物，依据天麻花序轴颜色不同可分为5个变型：红天麻、绿天麻、乌天麻、黄天麻与松天麻。“不同天麻的变型天麻素差异显著，主要药用活性成分为天麻素（对-羟甲基苯-β-D-吡喃葡萄糖），不同种质间天麻素含量差异较大；不同变型间的天麻块茎在形态上几乎没有差异，难以从形态学上准确区分，给种质资源鉴定、良种选育、加工和临床用药等带来很大的困难；亟需利用DNA分子鉴定的方法，为该药材良种选用及用药安全提供重要技术支撑。”会上，周天华分表示。
　　谈及DNA指纹图谱与分子鉴定技术问题，周天华表示：“不同个体都具有独一无二的DNA组成；DNA指纹图谱技术是通过研究不同个体的特定DNA片段，用于个体识别，鉴定亲缘关系，遗传育种等；常见的DNA指纹图谱（分子标记）RAPD, RFLP, AFLP, ISSR, SSR, SNP。微卫星DNA（Microsatellite DNA）也称为简单重复序列（simple sequence repeats, SSRs），是由1~6bp的重复单元串联而成一段DNA，并且广泛的分布于核基因组与叶绿体基因中；不同种质植物之间的微卫星DNA片段会产生较为明显的差异性，可以用于区分不同种或者同种不同个体；其多态性高，特异性强，区分度好，开发难度大；目前DNA指纹鉴定图谱技术已经广泛的应用于中药鉴定领域。”他还强调，本研究旨在开发天麻微卫星分子标记，为天麻的良种选育与用药安全提供技术支撑。
　　会上，周天华还介绍了研究思路与方法。他讲到，在陕西、湖北、云南、贵州四个产地采集天麻乌、红、绿3种变型，共计12个种群，120个个体；通过二代测序技术，建立基因组文库，筛选微卫星片段，建立天麻微卫星文库；对天麻的微卫星文库进行特征分析，利用软件开发天麻SSR引物60多对，对60多引物对部分样本的PCR扩增与聚丙烯酰胺凝胶电泳，筛选出具有较高多态性的引物；最后利用所筛选的引物对120个样本进行扩增与检查；统计条带，建立天麻SSR指纹鉴定图谱。其中，120个天麻样本中共检测出有112种基因型组合；绝大多数个体有特异基因型，共享基因型的仅发生在种群内；表明微卫星分子标记在个体水平上有较高的鉴定效率。
　　最后，周天华总结了该研究成果，一是开发了天麻微卫星分子标记1套，共20对，特异性强，多态性高；二是天麻的遗传多样性高与遗传分化强烈；三是微卫星分子标记的鉴定效率高。应用前景包括种质资源鉴定、良种选育、混伪品鉴定、物种保护、标志性特征构建及DNA指纹图谱构建。
　　2018第六届全国天麻会议暨宁强第二届天麻贸易洽谈会由中国菌物学会主办，中共宁强县委、宁强县人民、易菇网、中国菌物学会菌物产业分会、陕西理工大学共同承办，由陕西省食药用菌工程技术研究中心、贵州乌蒙腾菌业有限公司、诸城市良工机械有限公司、陕西汉中思青科技农业开发有限公司、宁强县真菌研究所、西乡县天麻研究所协办，并得到了陕西庆瑞丰食药用菌科技有限公司、陕西森盛菌业科技有限公司、西乡县食用菌研究所、汉中市永诚塑业有限公司、岳西县俊峰机械加工厂、岳西县岳工机械有限公司、安徽财萱新能源有限公司、安徽绿星节能科技有限公司、德江县绿通天麻发展有限公司、略阳县荣昌食用菌种植农民专业合作社、安徽省金寨县宏志天麻专业合作社的大力支持。本次会议除主旨报告外，还举行有天麻“两菌一种”发展高峰论坛、天麻药食同源产业发展高峰论坛、天麻产业精准扶贫经验交流会、新产品新技术交流会、中国（汉中·宁强）天麻产业发展高峰论坛，以及天麻产业博览会，会议同期还举行了良工机械天麻行业客户答谢晚宴，庆瑞丰招商推介会暨客户联谊会以及参观西乡县食用菌研究所等活动。第六届全国天麻会议在宁强的召开，为我国天麻主产区产业升级，助推扶贫起到极大作用，也将成为天麻产业具有历史意义的一次盛会。