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myb 发表于 2009-8-6 19:45:14

[原创]多脂磷伞核酸成分的药效研究

 
<p>&nbsp; </p>
<p>－．多脂磷伞核酸成分的提取方法</p>
<p>1. 取多脂磷伞加入氯仿后研磨； </p>
<p>2、 然后加入核酸提取液（100mM Tris－Hcl, 50mM EDTA, 50mM Nacl, 1.5%SDS）； </p>
<p>3、 混均后于10000转/分离心20分钟； </p>
<p>4、 吸上清液加入预先装有无水乙醇的离心管中； </p>
<p>5、 振荡2次，12000转/分离心10分钟； </p>
<p>6、 倒掉上清液，加70％乙醇洗涤； </p>
<p>7、 　所得到的沉淀干燥后即可。 </p>
<p>二．多脂磷伞核酸成分的药效研究</p>
<p><strong>　摘　要</strong>　研究结果表明，多脂磷伞核酸成分具有提高机体免疫能力和增强体力能力．其作用机理是多脂磷伞核酸成分能增加机体的蛋白质合成作用．</p>
<p>　<strong>1</strong><strong>　材料</strong></p>
<p>1.1　药物：多脂磷伞核酸成分为多脂磷伞中提取的核酸物质。。<br/>　　1.2　动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重(22±2) g，购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心。</p>
<p><strong>2</strong><strong>　方法与结果</strong></p>
<p>2.1 对小鼠免疫器官重量的影响&nbsp; </p>
<p>&nbsp;&nbsp; 　将小鼠分别每天灌胃药物或同体积蒸馏水0.2ml/10g体重，每日1次，连续7天。模型组和药物组分别于实验第1，3，5，6天腹腔注射环磷酰胺10mg/kg,于第7日，末次给药后1h,所有小鼠脱颈椎处死。取脾和胸腺，剥离干净，称重，以mg/10g体重计算脾指数及胸腺指数，结果见表1。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>表1 多脂磷伞核酸对小鼠免疫器官重量的影响(x±s)</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp; 组别&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 剂量&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 动物数&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 脾指数&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 胸腺指数</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; （mg/kg）&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (只)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; （mg/10g）&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (mg/10g)&nbsp; </p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;对照&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp; 64.61±16.82^**&nbsp;&nbsp;&nbsp; 35.73±9.40^**</p>
<p>&nbsp;模型&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;10&nbsp;&nbsp; 44.56±14.23&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;19.88±7.95</p>
<p>&nbsp;多脂磷伞核酸　　1000&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp; 54.68±12.46^*&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 29.69±7.36^*</p>
<p>500&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;10&nbsp;&nbsp; 53.12±12.57^*&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 28.36±7.98^*</p>
<p>&nbsp;　　　　　　　　　250&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp; 52.67±15.88^*&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 28.45±8.58^*</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 与模型组比较&nbsp; ^*&nbsp;P&lt;0.05, ^** P&lt;0.01 。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp; 结果表明，多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠的脾和胸腺重量。提示其具有提高小鼠免疫功能的作用。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>2.2 对小鼠单核巨噬细胞系统吞噬功能的影响&nbsp; </p>
<p>小鼠分别灌胃药物或同体积蒸馏水，每日一次，连续7天，于末次给药后1h尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g,于注射后2及20min分别从眼眶静脉丛取血20μl，加到2ml 0.1%Na₂CO₃溶液中摇匀，在680nm处测定光密度，计算吞噬指数K和吞噬活性α。结果见表2。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>表2 多脂磷伞核酸成分对小鼠单核巨噬细胞系统吞噬功能的影响(x±s)</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp; 组别&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 剂量&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 动物数 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;吞噬指数&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 吞噬活性</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (mg/kg)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; （只）&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; K&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; α </p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;对照&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.028±0.017&nbsp;&nbsp; 5.28±1.03</p>
<p>&nbsp;左旋咪唑&nbsp;&nbsp;&nbsp; 25&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.047±0.020^*&nbsp; 6.68±1.02^*&nbsp;&nbsp;&nbsp; </p>
<p>&nbsp;多脂磷伞核酸&nbsp; 1000 　　10&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;0.047±0.017^*&nbsp;&nbsp; 6.67±0.95^*</p>
<p>&nbsp; 　　　　　　　&nbsp;&nbsp; &nbsp;500&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.046±0.014^*&nbsp; 6.66±0.88^*</p>
<p>&nbsp;　　　　　　　250&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;0.045±0.015^*&nbsp;&nbsp; 6.47±0.98^*</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>与对照组比较 ^*&nbsp;P&lt;0.05</p>
<p>&nbsp;&nbsp; 结果表明，&nbsp; 多脂磷伞核酸成分具有提高正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的作用。提示其具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>2.3对小鼠溶血素抗体生成的影响</p>
<p>小鼠分别每天灌胃药物或同体积蒸馏水0.2ml/10g体重，每日1次，连续7天。模型组和药物组分别于实验第1，3，5，6天腹腔注射环磷酰胺10mg/kg,在给药第1天，每只小鼠用5％鸡红细胞0.2ml腹腔注射进行免疫，给药第7天眼眶静脉丛取血20μl，加入1ml生理盐水中摇匀，再加入5％鸡红细胞0.5ml,在冰浴中加入0.5ml补体（1：10新鲜豚鼠血清），在37℃恒温水浴中温育30min,在冰浴中终止反应3min，2000rpm离心10min,取上清1ml，加入3ml都氏液，室温静置10min后，在540nm处测光密度值，结果见表3。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 表3&nbsp; 多脂磷伞核酸成分小鼠溶血素抗体生成的影响(x±s)</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp; 组别&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 剂量&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 动物数&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 溶血素抗体</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; （mg/kg）&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; (只)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; （OD）&nbsp; </p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;对照&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.028±0.011^*</p>
<p>&nbsp;模型&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.017±0.009</p>
<p>&nbsp;多脂磷伞核酸　　1000&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.036±0.012^**</p>
<p>500&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.025±0.008^*</p>
<p>&nbsp;　　　　　　　　　250&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 10&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 0.027±0.009^*</p>
<p><br/><br clear="all"/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 与模型组比较&nbsp; ^*&nbsp;P&lt;0.05, ^** P&lt;0.01 。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp; 结果表明，多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠溶血素抗体的生成，提示其具有提高小鼠体液免疫功能的作用。</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>2.4　耐缺氧能力</p>
<p>　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水,末次给药24h后,将小鼠放入容积为250ml含5g钠石灰的广口瓶中，塞紧，1只／瓶，记录小鼠存活时间，结果见表。多脂磷伞核酸成分可明显延长小鼠常压缺氧下的存活时间。具有耐缺氧作用．</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp; 多脂磷伞核酸对小鼠常压耐缺氧能力的影响（x±s,n=10）</p>
<p>&nbsp;组 别&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 剂 量(ｍg/kg)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 存活时间(min) &nbsp;</p>
<p>对照&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; －&nbsp; 　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; 　　　 34±8.9 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</p>
<p>多脂磷伞核酸&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 1000&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 47±13^{*&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;}</p>
<p>500　　　　　　43±11^*&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; </p>
<p>250　　　　　　　42±13 ^* 　　</p>
<p>与对照比较，^*P&lt;0.05</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>2.5　增强机体体力作用（抗疲劳作用）</p>
<p>&nbsp;对小鼠游泳时间的影响　　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药24h后，将小鼠投入温度为23～25℃的水中，记录小鼠游泳时间，结果见表。多脂磷伞核酸成分能明显延长小鼠游泳时间。具有增强机体体力作用．</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;多脂磷伞核酸成分对小鼠游泳时间的影响（x±s,n=10）</p>
<p>&nbsp;组 别&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 剂 量(ｍg/kg)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 游泳时间(min) &nbsp;</p>
<p>对照&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; －&nbsp; 　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; 201±36 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;</p>
<p>多脂磷伞核酸1000&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 296±58^*^＊*</p>
<p>500　　　　　　　275±53^*</p>
<p>250　　　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 262±48 ^* 　</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 与对照比较，^＊P&lt;0.05,^**^＊P&lt;0.001</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>2.6　促进蛋白质合成作用</p>
<p>　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药1h后，将小鼠处死，取肝组织，测蛋白质含量，结果见表。多脂磷伞核酸成分能明显增加小鼠肝组织蛋白质含量。具有促进蛋白质合成作用．</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　　 多脂磷伞核酸成分对小鼠肝蛋白质含量的影响(x±s,n=10)</p>
<p>组别　　剂量(ｍg／kg)　　蛋白质(mg／g)&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; </p>
<p>对照&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;　　&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; 　　274±28&nbsp; 　　　　　　　</p>
<p>多脂磷伞核酸1000 　301±25*</p>
<p>500　　295±19*</p>
<p>250　　286±16*</p>
<p>与对照比较&nbsp; *P&lt;0.05 &nbsp;</p>
<p><br/>&nbsp;</p>
<p>3.讨论</p>
<p>多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠的脾和胸腺重量，具有提高正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的作用，能明显提高免疫抑制小鼠溶血素抗体的生成，提示其具有提高小鼠免疫功能的作用。多脂磷伞核酸成分可明显延长小鼠常压缺氧下的存活时间，具有耐缺氧作用；能明显延长小鼠游泳时间，具有增强机体体力作用；能明显增加小鼠肝组织蛋白质含量，具有促进蛋白质合成作用．</p>
<p>上述结果表明，多脂磷伞核酸成分具有提高机体免疫能力和增强体力能力．其作用机理是多脂磷伞核酸成分能增加机体的蛋白质合成作用．</p>

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