[原创]多脂磷伞核酸成分的药效研究

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－．多脂磷伞核酸成分的提取方法

1. 取多脂磷伞加入氯仿后研磨；

2、 然后加入核酸提取液（100mM Tris－Hcl, 50mM EDTA, 50mM Nacl, 1.5%SDS）；

3、 混均后于10000转/分离心20分钟；

4、 吸上清液加入预先装有无水乙醇的离心管中；

5、 振荡2次，12000转/分离心10分钟；

6、 倒掉上清液，加70％乙醇洗涤；

7、 　所得到的沉淀干燥后即可。

二．多脂磷伞核酸成分的药效研究

　摘　要　研究结果表明，多脂磷伞核酸成分具有提高机体免疫能力和增强体力能力．其作用机理是多脂磷伞核酸成分能增加机体的蛋白质合成作用．

　1　材料

1.1　药物：多脂磷伞核酸成分为多脂磷伞中提取的核酸物质。。
　　1.2　动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重(22±2) g，购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心。

2　方法与结果

2.1 对小鼠免疫器官重量的影响 

   　将小鼠分别每天灌胃药物或同体积蒸馏水0.2ml/10g体重，每日1次，连续7天。模型组和药物组分别于实验第1，3，5，6天腹腔注射环磷酰胺10mg/kg,于第7日，末次给药后1h,所有小鼠脱颈椎处死。取脾和胸腺，剥离干净，称重，以mg/10g体重计算脾指数及胸腺指数，结果见表1。

 

表1 多脂磷伞核酸对小鼠免疫器官重量的影响(x±s)

 

  组别      剂量       动物数      脾指数        胸腺指数

          （mg/kg）     (只)      （mg/10g）      (mg/10g) 

 

 对照                     10   64.61±16.82^**    35.73±9.40^**

 模型                     10   44.56±14.23      19.88±7.95

 多脂磷伞核酸　　1000      10    54.68±12.46^*     29.69±7.36^*

500       10   53.12±12.57^*     28.36±7.98^*

 　　　　　　　　　250       10  52.67±15.88^*     28.45±8.58^*

 

     与模型组比较  ^*  P<0.05, ^** P<0.01 。

 

   结果表明，多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠的脾和胸腺重量。提示其具有提高小鼠免疫功能的作用。

 

2.2 对小鼠单核巨噬细胞系统吞噬功能的影响 

小鼠分别灌胃药物或同体积蒸馏水，每日一次，连续7天，于末次给药后1h尾静脉注射印度墨汁0.1ml/10g,于注射后2及20min分别从眼眶静脉丛取血20μl，加到2ml 0.1%Na₂CO₃溶液中摇匀，在680nm处测定光密度，计算吞噬指数K和吞噬活性α。结果见表2。

 

表2 多脂磷伞核酸成分对小鼠单核巨噬细胞系统吞噬功能的影响(x±s)

 

  组别      剂量       动物数      吞噬指数        吞噬活性

           (mg/kg)      （只）         K             α

 

 对照                    10       0.028±0.017   5.28±1.03

 左旋咪唑    25          10       0.047±0.020^*  6.68±1.02^*   

 多脂磷伞核酸  1000 　　10       0.047±0.017^*   6.67±0.95^*

  　　　　　　　    500     10       0.046±0.014^*  6.66±0.88^*

 　　　　　　　250     10       0.045±0.015^*   6.47±0.98^*

 

与对照组比较 ^*  P<0.05

   结果表明，  多脂磷伞核酸成分具有提高正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的作用。提示其具有提高小鼠细胞免疫功能的作用。

 

2.3对小鼠溶血素抗体生成的影响

小鼠分别每天灌胃药物或同体积蒸馏水0.2ml/10g体重，每日1次，连续7天。模型组和药物组分别于实验第1，3，5，6天腹腔注射环磷酰胺10mg/kg,在给药第1天，每只小鼠用5％鸡红细胞0.2ml腹腔注射进行免疫，给药第7天眼眶静脉丛取血20μl，加入1ml生理盐水中摇匀，再加入5％鸡红细胞0.5ml,在冰浴中加入0.5ml补体（1：10新鲜豚鼠血清），在37℃恒温水浴中温育30min,在冰浴中终止反应3min，2000rpm离心10min,取上清1ml，加入3ml都氏液，室温静置10min后，在540nm处测光密度值，结果见表3。

 

        表3  多脂磷伞核酸成分小鼠溶血素抗体生成的影响(x±s)

 

  组别      剂量       动物数         溶血素抗体

          （mg/kg）     (只)            （OD） 

 

 对照                     10           0.028±0.011^*

 模型                     10           0.017±0.009

 多脂磷伞核酸　　1000       10           0.036±0.012^**

500      10           0.025±0.008^*

 　　　　　　　　　250     10          0.027±0.009^*

 

     与模型组比较  ^*  P<0.05, ^** P<0.01 。

 

   结果表明，多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠溶血素抗体的生成，提示其具有提高小鼠体液免疫功能的作用。

 

2.4　耐缺氧能力

　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水,末次给药24h后,将小鼠放入容积为250ml含5g钠石灰的广口瓶中，塞紧，1只／瓶，记录小鼠存活时间，结果见表。多脂磷伞核酸成分可明显延长小鼠常压缺氧下的存活时间。具有耐缺氧作用．

 

    多脂磷伞核酸对小鼠常压耐缺氧能力的影响（x±s,n=10）

 组 别      剂 量(ｍg/kg)      存活时间(min)  

对照         －  　         　　　 34±8.9        

多脂磷伞核酸      1000            47±13^*               

500　　　　　　43±11^*     

250　　　　　　　42±13 ^* 　　

与对照比较，^*P<0.05

 

2.5　增强机体体力作用（抗疲劳作用）

 对小鼠游泳时间的影响　　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药24h后，将小鼠投入温度为23～25℃的水中，记录小鼠游泳时间，结果见表。多脂磷伞核酸成分能明显延长小鼠游泳时间。具有增强机体体力作用．

 

 多脂磷伞核酸成分对小鼠游泳时间的影响（x±s,n=10）

 组 别      剂 量(ｍg/kg)     游泳时间(min)  

对照         －  　         201±36        

多脂磷伞核酸1000             296±58^*＊*

500　　　　　　　275±53^*

250　　　　      262±48 ^* 　

              与对照比较，^＊P<0.05,^**＊P<0.001

 

2.6　促进蛋白质合成作用

　将成年小鼠50只按表分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药1h后，将小鼠处死，取肝组织，测蛋白质含量，结果见表。多脂磷伞核酸成分能明显增加小鼠肝组织蛋白质含量。具有促进蛋白质合成作用．

 

    　　 多脂磷伞核酸成分对小鼠肝蛋白质含量的影响(x±s,n=10)

组别　　剂量(ｍg／kg)　　蛋白质(mg／g)     

对照        　　     　　274±28  　　　　　　　

多脂磷伞核酸1000 　301±25*

500　　295±19*

250　　286±16*

与对照比较  *P<0.05  

 

3.讨论

多脂磷伞核酸成分能明显提高免疫抑制小鼠的脾和胸腺重量，具有提高正常小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的作用，能明显提高免疫抑制小鼠溶血素抗体的生成，提示其具有提高小鼠免疫功能的作用。多脂磷伞核酸成分可明显延长小鼠常压缺氧下的存活时间，具有耐缺氧作用；能明显延长小鼠游泳时间，具有增强机体体力作用；能明显增加小鼠肝组织蛋白质含量，具有促进蛋白质合成作用．

上述结果表明，多脂磷伞核酸成分具有提高机体免疫能力和增强体力能力．其作用机理是多脂磷伞核酸成分能增加机体的蛋白质合成作用．