食用菌制种篇

sopower 发表于 2008-3-17 13:49:21

1.母种(一级种)制作：①用具、设备：手提消毒锅、铝锅、试管、电炉、棉花、漏斗、PH试纸、接种箱或超净台、培养箱等。 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　②培养基配方：去皮马铃薯<?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="200" unitname="克" w:st="on">200克</st1:chmetcnv>、葡萄糖<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv>、琼脂<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv>、磷酸二氢钾<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue=".5" unitname="克" w:st="on">0.5克</st1:chmetcnv>、磷酸氢二钾<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue=".1" unitname="克" w:st="on">0.1克</st1:chmetcnv>、硫酸镁<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue=".5" unitname="克" w:st="on">0.5克</st1:chmetcnv>、蛋白胨<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="2" unitname="克" w:st="on">2克</st1:chmetcnv>、PH值根据不同食用菌品种进行调节，草菇PH值7.5，水1000亳升。<o:p></o:p>
 　　③工艺流程：去皮马铃薯加水1000毫升煮沸10-15分钟→过滤取滤液→加水至1000毫升后加入琼脂煮溶→加葡萄糖等搅拌→调节PH值→分装试管→塞棉塞→灭菌→摆斜面→按种、培养→检验→母种成品。 <o:p></o:p>
　　2．原种、栽培种的制作：①用具、设备：灭菌锅（灶）、接种箱、培养架、接种工具、菌种袋、棉塞等。 <o:p></o:p>
　　②原料：棉籽壳木屑、稻草、麸皮、石灰、石膏等。以棉籽壳为主原料的配方：棉籽壳88%，麦麸8%，石膏2%，石灰2%。 <o:p></o:p>
　　③工艺流程：浸料→堆制发酵→拌料调酸碱度→装瓶（袋）→灭菌→接种→培养→检验→原种或栽培种成品。 <o:p></o:p>
　　　　　　　　　　食用菌的繁殖 <o:p></o:p>
 　　在食用菌的栽培过程中，菌种性状的优劣直接影响到栽培的成败和丰欠。因此，我们必须获取优质菌种，使所生产的食用菌，达到优质高产。食用菌的菌种培养建立在食用菌的遗传和变异的基础上。所谓遗传是指下一代与上代间性状的稳定性，而变异则是指这些稳定性状的改变。变异是自然界的普遍规律之一，任何生物的任何性状都会发生变异。即是从同一个蘑菇子实体中采集来的孢子，它们之间在菌落形态，菌丝粗细，分支疏密，出菇快慢，对温度、氧气、PH、养分的需要及结菇能力上，也会或多或少的出现差异。如果没有遗传，也就没有变异的相对稳定。因此，我们一方面要打破遗传的保守性，促成菌种的变异，同时又要通过选择，把有益的变异传递给下一代，这样才能不断培养选育出高产优质的菌株来。 <o:p></o:p>
 　　获得一个优良菌种不难，而长期保存住一个菌种的优良性状就很难了。这里介绍的菌种制作技术，在一定意义上讲，就是从保存菌种的优良性状着眼，从一般生产实际出发，为保证食用菌能获得优质高产而采取的措施。 <o:p></o:p>
 　　食用菌绝大多数属子担子菌，少数为子囊菌。食用菌的繁殖，有关资料已有详细介绍。为了菌种制作需要，这里简单介绍一下伞菌类、木耳和银耳的生活史知识，以使菌种制作有理论依据。 <o:p></o:p>
 　　（一）伞菌类<o:p></o:p>
 伞菌类是现在栽培的主要食用菌，伞菌属担子菌纲，有担子果。子实层生长在菌褶的表面，子实层中的担子紧密地排成一层，担子棒状，无分隔，顶端4个小便，每个小硬立长一个担孢子。有些种类在子实层中有少数型体较大的细胞，叫隔胞（囊状体），其一般比担子长和粗，超出子实层外。子实层的基部是拟薄壁组织，叫子实层基。菌褶的中央部位，菌丝排列疏松，叫菌髓。 <o:p></o:p>
 　　担孢子成熟后，从小梗上脱落，萌发成单枚菌丝体。两条单核菌丝细胞进行接合，而成双核菌丝。异宗结合，必须具备2种可亲和的"＋"和"-"菌丝才能接合。 <o:p></o:p>
 　　双核菌丝细胞分裂时还发生锁状联合，首先在二个核之间的壁上，产生一个小突起，形似极短的小分支。分支向下弯曲，其顶端与母细胞的另一处融合，先是细胞的一个核移入突起内，随后二个核各自进行有丝分裂，形成四个核，二个在细胞的上部，一个在下部，另一个在短分支内，这时细胞生出两个隔膜，把细胞一分为二。突起中的一个核随后也移入后一个细胞内，从而构成了二个双核细胞。双核菌丝的这种锁状联合，除少数子囊菌纲的某些块菌外，只存在于担子菌中。但担子菌纲中如红菇、乳菇、蜜环菌等就无锁状联合现象。 <o:p></o:p>
 　　双核菌丝不断分裂，生长发育，在适宜条件下，可以生出菌蕾，形成子实体，完成一个世代。 <o:p></o:p>
 　　（二）木耳、银耳类 <o:p></o:p>
　　木耳、银耳可称为耳类，子实体的形状如耳，整体由胶质化的菌丝组成。耳片的最表面，是由担子和侧丝紧密排列而成的子实层。银耳的子实层，生于耳片的上下两个表面；黑木耳、木耳的子实层只生于下表面，上表面着生绒毛。耳片中间有一至数层的层带、木耳、银耳、双核菌丝是通过锁状联合的方式，在基质表面形成子实体原基，不断发育成子实体<o:p></o:p>
 　　人工培养出来供进一步繁殖用的纯菌丝体就是菌种，它相当农作物的种苗。无菌种，人工栽培无法进行；菌种不良；不能获得优质高产。但菌种必须在无菌的条件下进行分离、接种和培养，因此要有一些基本的设备，除要有实验室、一配料室和培养室外，还要有 <o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:50:43

消毒灭菌 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　（一）常用消毒剂 <o:p></o:p>
 　　现将常用的消毒药品及其配制、使用方法，介绍如下： <o:p></o:p>
 　　 1．35％甲醛水溶液（HCHO）：又名福尔马林，使蛋白质变性。用于培养室、无菌室的灭菌。 <o:p></o:p>
 　　 2．0.1％的升汞水（HgCL3）：能使蛋白质变性，抑制酶类。0.1％升汞配制方法是称取升汞<?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue=".1" unitname="克" w:st="on">0.1克</st1:chmetcnv>，用少许酒精溶解，再加水至100毫升即成。用于无菌箱、培养箱、培养皿四周表面以及手指的灭菌。 <o:p></o:p>
 　　 3．石炭酸（C6H5OH），5％浓度喷雾后，能使蛋白变性沉淀。石炭酸（苯酚）50毫升，加水950毫升配成。用于工作服、实验桌的灭菌。杀菌效果同升汞。 <o:p></o:p>
 　　 4．高锰酸钾（KMnO4）：氧化剂。0.1％浓度能使蛋白质与氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或杀死杂菌。 <o:p></o:p>
 　　 5．乙醇（CH3CH3OH）：又称酒精。消毒以75％浓度的效果最好。它能使蛋白质脱水变性。高浓度酒精会使蛋白质很快脱水凝固，消毒作用反而减弱。 <o:p></o:p>
 　　 6．新洁尔灭：0.25％新洁尔灭用于无菌箱、无菌室的灭菌。一般新洁尔灭5％原液50毫升；加水950毫升配成。 <o:p></o:p>
 　　 7．漂白粉水：取漂白粉<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="10" unitname="克" w:st="on">10克</st1:chmetcnv>，加水140毫升配成。通常在使用前临时配制，静置1～2小时，取上清液喷射，进行室内消毒，每平方米用<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="升" w:st="on">1升</st1:chmetcnv>。 <o:p></o:p>
 　　 8．药皂：煤酚皂、硼酸皂等各种药皂的水溶液，均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。 <o:p></o:p>
 　　 9．2％硫酸铜溶液：用硫酸铜（胆矾）<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="2" unitname="克" w:st="on">2克</st1:chmetcnv>，加水至 100毫升加热溶解配成。用于床架、木架等各种菌种架的消毒。还可用5％硫酸铜溶液。 <o:p></o:p>
 　　 10．0.5％波尔多液：先用硫酸铜1斤，溶于100斤水，再用石灰1斤，加水100斤。然后等量混合起来即成。用于菌种架、段木的消毒。<o:p></o:p>
　　 11.多菌灵：用于杀灭真菌、半知茵。1：800倍拌料或 1：500倍喷洒均可。 <o:p></o:p>
 　　（二）无菌箱及无菌室的消毒灭菌 <o:p></o:p>
 　　无菌箱的消毒灭菌，可采取以下几种方法： <o:p></o:p>
 　　 l．用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。 <o:p></o:p>
 　　 2．0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行指擦，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。喷雾后 20～30分钟，箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被杀死，内部的空气就变得很清洁。 <o:p></o:p>
 　　 3．紫外线照射灭菌：在无菌箱中装一支200伏、3O瓦的紫外线灯管；每次开20～30分钟，就能达到空间杀菌的目的。照射结束后，罩黑布半小时，以增强杀菌效果。 <o:p></o:p>
 　　 4．石炭酸喷雾：在每次接种之前，用5％石炭酸溶液喷雾，可促使空气中的微粒和杂菌沉降，防止桌面微尘飞扬，并有杀菌作用。 <o:p></o:p>
 　　 5．石灰揩擦：经常用药物熏蒸，易造成酸性环境，特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久，污染往往越来越严重，预防办法可把各种药品交替使用，过一段时间（约五周）用石灰擦洗一遍。实践证明，这样做效果很好。 无菌室消毒同无菌箱。<o:p></o:p>
 　　（三）无菌室的使用规程 <o:p></o:p>
 　　无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程： <o:p></o:p>
 　　 1．接种室内和缓冲室内使用前，用5％石炭酸溶液喷雾。把所需要的器材搬入缓冲室清洗，等晒干后搬入接种室，打开紫外线灯，照射杀菌。 <o:p></o:p>
 　　 2．穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用煤皂液洗手2 分钟。进人接种室后，查验器械是否放在一定位置。然后用 5％石炭酸溶液重点在工作台的上方和附近的地面上喷雾。然后退回缓冲室。还可给接种室门口地面洒一层石灰，进门时踩石灰可使鞋底保持无杂菌状态。 <o:p></o:p>
 　　 3．接种操作前，用70％的酒精棉球擦手。进行无菌操作时，要严格认真，动作轻捷，尽量减少空气流动。 <o:p></o:p>
 　　 4．工作结束后，立即将台面收拾干净，不留残物。然后用5％石炭酸全面喷洒。 <o:p></o:p>
 　　 5．操作时，注意安全。如棉塞着火，用手紧握即可熄灭。如打破菌瓶，可用抹布沾5％石炭酸，收拾到废物桶内。每次的污染物应小心放在盘内，盖严拿出室外深埋或烧掉。<o:p></o:p>
 　　（四）无菌室空气污染情况的检验 <o:p></o:p>
 　　定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下： <o:p></o:p>
 　　 1．平板检验法：用常规培养基，倒成平板，收入接种室。在事先熏蒸好的接种室，使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开，按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="℃" w:st="on">30℃</st1:chmetcnv>的温箱中培养48小时，检查有无菌殖生长，并由菌落形态，判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟，菌落不超过3个；叙面培养基开塞 30分钟者，以不出现菌落为合格。 <o:p></o:p>
 　　 2．斜面检验法：将常用的琼脂斜面培养基各取二管，放入接种室，按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出，放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48小时后，检验无杂菌生长。和上边方法同。 <o:p></o:p>
 　　 3．空气污染情况检验：在接种过程中，人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染，检验方法是在准备工作结束后，接种操作开始时，按上述方法打开培养皿盖子或试管塞，经5分钟、30分钟或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内，空气污染的程度。 <o:p></o:p>
 　　如霉菌较多时；可先用5％石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。<o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:52:26

培养基的制备<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　根据各种食用菌生长时对营养物质的要求，用人工方法配制而成的营养基质，供菌丝生长发膏。把这种营养物质叫培养基。它如同农作物需要土壤、肥料，动物需要饲料一样。<o:p></o:p>
 　　（一）培养基种类 <o:p></o:p>
 　　目前，人们采用的培养基相当多，种类各不相同。不论哪种培养基都有共同特点：一般都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。水分是食用菌的组成成分，食用菌在生理活动中，需要在有水的情况下进行。 <o:p></o:p>
 　　碳源是构成细胞物质的主要元素，也是食用菌生长发膏所需能量来源。碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。 <o:p></o:p>
 　　氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素，蛋白质和核酸是生命的基本物质。一切生命活动都离不开这些物质。氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸银、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。培养基中的无机盐虽用量不多；但不可缺少。它主要是酶类的组成成分，调节各种生命代谢活动。如磷酸二氢钾、硫酸镁。 <o:p></o:p>
　　生长因素需要量很少，是培养基中的特殊营养物质，它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。如马铃薯、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，维生素也属此类。根据营养物质的来源，黄年来等同志进行了细致的分类，把所有培养基分成三大类： <o:p></o:p>
 　　 1.天然培养基：它是利用天然的有机物配制而成的培养基。这种培养基来源广，成本低，很适合实胨生产。特别具备营养丰富、制备方便、经济实用等优点。但他学成分不能定量，每批成分也不稳定，因此不宜用来进行精确的科学实验。常用的天然培养基，有马铃薯培养基、麦芽汁培养基、杏汁培养基、苹果培养基、麦芽培养基、堆肥培养基等。 <o:p></o:p>
 　　 2.半合成培养基：在天然培养基中，适当增加无机盐类，或在合成培养基中添加少量别的有机物，成为半合成培养基，介于天然培养基和合成培养基之间。主要目的是促进菌丝生长发膏。 <o:p></o:p>
 　　 3.合成培养基：用化学成分已知的有机物或无机物配制而成的培养基。由于各种化学成分已经清楚，容易控制，所以适合某些定性和定量研究。<o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:55:10

（二）食用菌母种分高用培养基的制作 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　食用菌的母种就是从孢子分离培养或组织分高培养获得的菌丝体。一般常在琼脂培养基上培养。 <o:p></o:p>
　　 1.马铃薯——蔗糖——球脂培养基（PDA）： <o:p></o:p>
 　　马铃薯煮汁 1000毫升 　　蔗糖 <?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　 PH值 5.5～6.0 <o:p></o:p>
 　　制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="200" unitname="克" w:st="on">200克</st1:chmetcnv>，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至1000毫升，装管（瓶）灭菌备用。一般食用菌母种的分离和培养都适合此培养基。 <o:p></o:p>
 　　 2.葡萄糖——麦芽膏——酵母膏培养基（GMY）： <o:p></o:p>
 　　麦芽膏 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="10" unitname="克" w:st="on">10克</st1:chmetcnv> 　　葡萄糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="11" unitname="克" w:st="on">11克</st1:chmetcnv> 　　酵母膏 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="4" unitname="克" w:st="on">4克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="18" unitname="克" w:st="on">18克</st1:chmetcnv> 　　水加至1000毫升 　　 PH值自然 <o:p></o:p>
 　　麦芽膏可用麦芽汁代替，<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="10" unitname="克" w:st="on">10克</st1:chmetcnv>麦芽膏可用<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="18" unitname="克" w:st="on">18克</st1:chmetcnv>勃力克司浓度的麦芽汁600毫升代替。 <o:p></o:p>
 　　 3.黄豆饼粉培养基： <o:p></o:p>
 　　黄豆饼粉 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="40" unitname="克" w:st="on">40克</st1:chmetcnv> 　　葡萄糖或蔗糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="18" unitname="克" w:st="on">18克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 　　 PH值自然 <o:p></o:p>
　　制法：称黄豆饼粉<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="40" unitname="克" w:st="on">40克</st1:chmetcnv>用清水调成糊状，再加水1000 毫升，煮沸后30分钟，过滤，用热水补足1000毫升，加入琼脂蔗糖溶化即可分装试管。 <o:p></o:p>
　　 4.玉米粉培养基： <o:p></o:p>
 　　玉米粉 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="克" w:st="on">30克</st1:chmetcnv> 　　蛋白胨 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　蔗糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="18" unitname="克" w:st="on">18克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 　　 pH值自然 <o:p></o:p>
 　　 5.木汁麦麸（米糠）培养基： <o:p></o:p>
　　麦麸（米糠） <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="100" unitname="克" w:st="on">100克</st1:chmetcnv> 　　硫酸铁 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="克" w:st="on">1克</st1:chmetcnv> 　　蔗糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 　　 pH值 5～6 <o:p></o:p>
 　　制法：将木屑用双层纱布包严煮沸20分钟取出木屑包，补足1000毫升水，加入琼脂、糖等拌匀溶化即可。 <o:p></o:p>
 　　 6.麦粒培养基： <o:p></o:p>
 　　小麦粒 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="200" unitname="克" w:st="on">200克</st1:chmetcnv> 　　糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="5" unitname="克" w:st="on">5克</st1:chmetcnv> 　　碳酸钙 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="15" unitname="克" w:st="on">15克</st1:chmetcnv> 　　水 500毫升 　　 PH值自然 <o:p></o:p>
 　　制法：取小麦<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="200" unitname="克" w:st="on">200克</st1:chmetcnv>洗净，置锅中加水500毫升，煮沸20分钟，加入其他成分，煮5分钟，用纱布过滤，水汁分装至试管的 1／3长度为好。 <o:p></o:p>
 　　 7.杏汁培养基（适合朴菇子实体的发生）： <o:p></o:p>
 　　干杏 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="25" unitname="克" w:st="on">25克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 15—<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="克" w:st="on">30克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 　　 PH值自然 <o:p></o:p>
 　　 8.胡萝卜培养基（代替马铃薯）： <o:p></o:p>
 　　胡萝卜 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="100" unitname="克" w:st="on">100克</st1:chmetcnv> 　　糖 18～<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="25" unitname="克" w:st="on">25克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 <o:p></o:p>
 　　 9.苹果培养基（适于草菇生长）： <o:p></o:p>
 　　苹果（压碎） <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="100" unitname="克" w:st="on">100克</st1:chmetcnv> 　　蛋白胨 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="2" unitname="克" w:st="on">2克</st1:chmetcnv> 　　蔗糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 <o:p></o:p>
 　　 10.高粱培养基（特别适于平菇类生长）： <o:p></o:p>
 　　高粱粉 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="克" w:st="on">30克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="10" unitname="克" w:st="on">10克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 <o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:55:35

11.粪汁培养基（供筛选蘑菇菌种）： <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　马厩肥 <?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="150" unitname="克" w:st="on">150克</st1:chmetcnv> 　　玉米粉（取汤） <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="克" w:st="on">30克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 20～<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="30" unitname="克" w:st="on">30克</st1:chmetcnv> 　　水 1000毫升 <o:p></o:p>
 　　 12.酸性培养基（供分离菌种及培养猴头菌）： <o:p></o:p>
 　　马铃薯（去皮） 200～<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="250" unitname="克" w:st="on">250克</st1:chmetcnv> 　　糖 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="克" w:st="on">20克</st1:chmetcnv> 　　琼脂 <st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="25" unitname="克" w:st="on">25克</st1:chmetcnv> 　　柠檬酸 1％～5％（灭菌后加人） 　　水 1000毫升 <o:p></o:p>
 　　（三）原种和栽培种培养料的制备 <o:p></o:p>
 　　原种是由母种繁殖而来，进而制成栽培种，用于播种、生产。 <o:p></o:p>
　　 1.粪草培养基（适于制作蘑菇菌种）： <o:p></o:p>
　　粪草(粪：草=6：4、堆积发酵15～20天) 90斤 　　米糠或麸皮 8斤 　　碳酸钙 1斤 　　糖 1斤 　　水适量 <o:p></o:p>
 　　 2.麦粒培养基（适于制作蘑菇、凤尾菇、毛木耳菌种）： <o:p></o:p>
 　　浸湿蒸透的麦粒 88％ 　　木屑 10％ 　　石膏 2％ 　　水 50％一60％ <o:p></o:p>
 　　 3.木屑米糠培养基（适宜各种木生食用菌的制作）： <o:p></o:p>
 　　阔叶树木屑 70％～80％ 　　米糠或麸皮 20％～28％ 　　碳酸钙 1％ 　　蔗糖 1％ 　　石膏 1％ 　　水调至适量 <o:p></o:p>
 　　 4.棉皮培养基（平菇、凤尾菇户） <o:p></o:p>
 　　棉籽壳 99％ 　　石膏粉 1％ <o:p></o:p>
 　　 5.玉米芯培养基： <o:p></o:p>
 　　玉米芯 99％ 　　石膏粉 1％ <o:p></o:p>
 　　 6.稻草培养基： <o:p></o:p>
 　　稻草 94％ 　　麸皮 5％ 　　石膏 1％ 　　蔗糖 1％ <o:p></o:p>
 　　 7.棉皮木屑培养基： <o:p></o:p>
 　　棉皮 78％ 　　木屑 20％ 　　蔗糖 1％ 　　石膏 1％ 　　水料比为 1.2～1.3：1 <o:p></o:p>
 　　 8.羊屎培养基（蘑菇）： 　　在侵漉屎中，加入1％～3％碳酸钙或1％石灰。 <o:p></o:p>
　　 9.玉米秆粉培养基: <o:p></o:p>
 　　玉米秆 78％ 　　麸皮 21％ 　　石膏 1％ <o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:55:54

（四）棉塞、牛皮纸盖、卫生纸气塞的制作 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　根据所栽培的品种选择适宜培养基，然后即可将培养基分装。 <o:p></o:p>
 　　分装是指琼脂培养基分装和原种、栽培种分装。装好培养基的试管、三角瓶或菌种瓶，应立即塞上大小适合的棉塞，以防杂菌侵入培养基。所用的棉花、以白色长绒的不脱脂棉花为理想。也可用人造塑料海绵代替棉花作瓶塞，效果很好。棉塞表面要光滑，松紧度要适当。温差变化比较大的地方，棉塞要塞紧一些。 <o:p></o:p>
 　　制作棉花塞时，先把棉花铺开，撕成5～6厘米宽的长条，用手握紧，粗度适当，棉塞要稍紧密，塞入后也不能起皱成沟。否则容易掉落，杂菌也容易跑进培养基。塞好棉塞的空试管，可用烘干箱加热到<?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="15" unitname="℃" w:st="on">15℃</st1:chmetcnv>左右，干热灭菌1小时后备用。 <o:p></o:p>
 　　菌种瓶棉塞和试管相同，只是粗细之别。另外，缺少棉花的地方，可用双层牛皮纸中间加一层棉花作瓶塞。还可用耐高温塑料纸作瓶塞。目前有些地方的菌种瓶是塑料纸中间打一小孔用胶布封严，接种时只要按操作把菌种放入小孔的办法，也可采用。 <o:p></o:p>
 　　母种试管口用卫生纸作透气塞。装好培养基后，试管口擦干净，把卫生纸（普通或高级均可），卷成同试管口一样粗细的筒，剪成5厘米长的小段，每段塞入试管内3厘米，外留2厘米，再扎成捆，用牛皮纸包严、灭菌。接种后还可用塑料胶布将试管口与卫生纸联封。培养按常规办法。 <o:p></o:p>
 　　原种瓶或栽培种瓶用卫生纸作通气寨时，先按一定配方装满瓶后，洗净瓶内外壁，把卫生纸剪成5厘米宽条幅，每条卷成同瓶口一样大小的简，塞入瓶内3厘米，外留2厘米；灭菌后接种、培养。 <o:p></o:p>
 　　塑料袋制种时，若用"两头"接种，装料后扎紧两头，然后将卫生纸剪成3厘米长、1厘米粗的小卷，用牛皮纸包严同塑料袋一起装锅灭菌，再放入接种箱消毒，操作时将袋口解开，接入菌种，再将卫生纸小卷夹在袋口中间，用线绳或皮筋扎紧即成。接种完毕后，按常规放入培养室管理。 <o:p></o:p>
 　　用塑料袋生料栽培食用菌时，两头可用卫生纸作通气塞。 <o:p></o:p>
 　　通过我们多次试验，卫生纸作透气塞，不会像棉花那样湿塞，避免了因湿塞而引起杂菌污染；卫生纸通气性能好、吸水性强、杂菌少，蒸发到瓶口的水珠不易积于料面；以往我们用棉花、塑料环，成本高，工序多，用卫生纸可大大降低成本。 <o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:56:09

（五）培养基的灭菌 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　按上述培养基装好后就要立即进行灭菌；将其中的杂菌杀死，然后才能接入我们所需要的纯菌种，进行培养。 <o:p></o:p>
 　　不论是母种分离时用的斜面培养基，还是原种、栽培种瓶培养基或聚丙烯塑料袋培养基，一般都采用热力灭菌法。 <o:p></o:p>
 　　高压蒸汽灭菌法：若是斜面试管培养基。应先用牛皮纸扎成捆，标明棉塞为上端部分，然后竖直放入高压锅内，进行灭菌。在1．5公斤／平方厘米压力下维持30分钟，即可达到灭菌目的。开锅取试管时，趁热放成斜面。经试验若无杂菌，可用。若有杂菌时，重新灭菌。 <o:p></o:p>
 　　灭菌材料如是原种和栽培种，应在15公斤／平方厘米压力保持60～90分钟。这样才能达到灭菌目的。达到所规定的时间后，应停火并逐渐排去蒸汽。待压力表的指针回复零位时，再把消毒锅的螺栓旋开，打开盖子，取出瓶子。停火排汽时必须注意，排汽阀不能一下子放大，只有一点一点开，让压力表慢慢地回复到原位，然后再揭锅盖。如果排汽过猛，锅内压力急速下降，则会造成棉塞脱落和玻璃容器破损。 <o:p></o:p>
 　　常压蒸汽灭菌法：如没有具备高压锅，可用土蒸锅或蒸笼进行。在常压的条件下，以 <?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="100" unitname="℃" w:st="on">100℃</st1:chmetcnv>的温度持续6-8小时，以杀死培养料中的各种杂菌。也可常压间歇灭菌3次。可先蒸1小时，然后隔24小时又如法蒸1次，连续3次，就可达到灭菌目的。<o:p></o:p>
 　　培养基的灭菌效果要经常检验，是否灭菌彻底：一般情况下，灭菌后的培养基最好应放在要培养的温度下，空白培养1周，可检查灭菌效果。如果在这一段时间内培养基没发生任何变化，说明灭菌效果良好，可以使用。 <o:p></o:p>

sopower 发表于 2008-3-17 13:56:30

制种的基本设备 <?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" /><o:p></o:p>
 　　人工培养出来供进一步繁殖用的纯菌丝体就是菌种，它相当农作物的种苗。无菌种，人工栽培无法进行；菌种不良；不能获得优质高产。但菌种必须在无菌的条件下进行分离、接种和培养，因此要有一些基本的设备，除要有实验室、一配料室和培养室外，还要有 <o:p></o:p>
 　　（一）接种箱（接种室） <o:p></o:p>
　　接种室和接种箱是进行菌种分离接种的场所，和外界空间隔绝，防止空气流动，经过一定的消毒措施后，室内就可达到无菌状态，防止分离和接种时污染杂菌。一般一个接种箱就可展开工作，如有条件也可建一个接种室。 接种箱是一个木材和玻璃制成的小箱子，箱内有紫外线灯和日光灯，接种箱前后，装有两扇能启闭的玻璃窗，箱前开两只圆口，圆口装有布套，一头钉在圆口上，另一头用松紧带缝合成袖套形，双手可伸入箱内操作.<o:p></o:p>
　　接种箱的特点：结构简单，造价低廉，消毒彻底，移动方便。但箱内容量小、操作不便，大规模的接种还需接种室。<o:p></o:p>
 　　接种室和接种箱一样，关闭要严密，应设在向阳、干燥处，面积6平方米，高<?xml:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" /><st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="2" unitname="米" w:st="on">2米</st1:chmetcnv>。地面墙壁要平整、光滑，以利室内灭菌，门窗关闭后要能和外界空气隔绝。 <o:p></o:p>
　　接种室外还有一缓冲间，是工作人员换衣帽及鞋的地方，并可防止外界空气直接进入接种室。缓冲室用拉门、减少空气流动，门不要在一条直线上。接种室和缓冲间都要装紫外线灯及日光灯各一支。接种室内有工作台及各种用具 <o:p></o:p>
　　（二）分离菌种所需器具 <o:p></o:p>
　　 1酒精灯：火焰灭菌用。 　　 2解剖刀：1～2把，供切割组织块，剖开种木用。 　　 3接种针：分离菌种时，批取孢子及菌丝。可用自行车钢条一端磨细弯成<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="3" unitname="毫米" w:st="on">3毫米</st1:chmetcnv>的小钩制成。 　　 4镊子：尖嘴小镊子一把，<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="厘米" w:st="on">20厘米</st1:chmetcnv>长的大镊子一把，主要用于摄取种菇或其他物品。 　　 5小榔头：敲打劈开种木时用。 　　 6试管：数量根据实际需要而定，用于培养料面菌种，试管口径以8一<st1:chmetcnv tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="20" unitname="厘米" w:st="on">20厘米</st1:chmetcnv>的较好。 　　 7培养皿：放置食用菌的子实体、采集孢子或注入培养基进行板培养等用。 　　 8漏斗：用于分装配好的培养基。 　　 9搪瓷盘：用于盛种器皿和用具。 　　 10三角瓶及烧杯：用于制备培养基。 　　 11量筒或量杯：用于计量溶液的体积。 　　 12铝锅及电炉：用于加热溶解琼脂等培养基原料。 　　 13天平：用于称量培养基原料。 　　 14棉花：用于制作瓶塞。少量脱脂棉花用于消毒。 　　 15温度计（干湿球温度计）：用于测量室内外温度和湿度。 　　 16试管架、铁丝试管笼：用于排放试管及装盛试管培养基进行灭菌消毒等。 　　 17培养容器：用于培养原种及栽培种。如玻璃瓶、塑料袋、塑料瓶。 　　 18．培养基灭菌设备：用于培养基的高温灭菌，常用高压锅，也可自制土蒸锅。 　　 19电热烘箱：用于干燥法测定含水量，以及玻璃器具的干热消毒灭菌。 　　 20恒温培养箱：用于恒温培养菌种。 　　 21冰箱：在高温季节，用于保存某些菌种。　　 22生物显微镜：用于观察、鉴定菌丝及孢子的形态、构造。 <o:p></o:p>
　　（三）其他仪器及用具<o:p></o:p>
　　 1孢子收集器：孢子收集器是用来采收菌类孢子的装置。 　　 2喷雾器：用于给子实体喷雾。 　　 3摇床：搞液体菌种制备，需要摇床。 　　 4注射器、铝丝筐、纱布。<o:p></o:p>

jiqimao318 发表于 2008-9-11 16:57:22

辛苦了，楼主 值得认真学习

海军发表于 2008-9-11 22:28:43

一、发菌期间的杂菌及防治措施 　　1、木霉：俗称绿霉、绿霉菌等，这是生产中发生最普遍、危害最严重的杂菌之一，不论制种还是栽培，也不论生料、熟料、发酵料，发菌期间均可发生，甚至在出菇阶段也有发生，并且发生的温度范围也越来越广，有的地区曾发生毁灭性污染，木霉就是主要杂菌之一。 　　防治措施：（1）制种或熟料栽培拌料时，按0．1％比例加入克霉灵并严格灭菌，以彻底杀死其孢子；生料栽培时，可按0．15％比例添克霉灵药物。发酵料栽培时，加克霉灵后，基料仍要发酵均匀，尽可能多的杀死或抑制其孢子。（2）科学调配基料组分，使营养全面、均衡，实践证明，基料中加入食用菌三维营养精素，增强菌丝的抗性，亦可有效抑制杂菌。（3）接种操作要严格、规范，不使霉菌孢子落于料中。（4）菌种或菌袋发菌以及出菇期间，每5天左右对菇棚空闲处喷洒500--1500倍细菌杀溶液有效的预防黄菇病。（5）发现木霉后，及时予以菌绝杀药粉直接撒施覆盖污染区，也可对配菌绝杀150倍左右溶液浸洗菌袋、培养室喷施40倍蘑菇祛病王、挖除霉点等处理。 　　2、曲霉：又称黄曲霉、黄霉病等，是目前除木霉外第二大杂菌品种。该霉菌除直接与食用菌菌丝争夺营养和水分以及生存空间外，还可分泌毒素严重危害食用菌菌丝；同时，其毒素还是一种致癌物质，严重危害人体健康。 　　防治措施：（1）参考木霉菌的相关内容。（2）培养室使用蘑菇祛病王和消毒粉进行严格消毒杀菌处理，将菌种移入后，应阻止无关人员随便进入。（3）发现初期污染时，小心移出培养室，对栽培袋采取切开塑膜、直接撒施菌绝杀药粉或150倍菌绝杀溶液浸洗等措施，对菌种则可挖除病斑后再用药；对污染较重者，应予以深埋或焚烧处理，以防造成二次污染。 　　3、毛霉：又称长毛菌、黑霉菌、黑毛菌等。毛霉的典型特征是菌丝发展迅速，成熟后其黑色孢子很快生出，适宜条件下，7天内其菌丝可将菌袋表面占领并变为黑色，严重时可使食用菌菌丝不再发展，危害较大。 　　防治措施：（1）首先清理接种室及培养室内外卫生，室外喷洒500倍多菌灵溶液，曾有毛霉发生的室内喷洒40～80倍蘑菇祛病王溶液后，再按每立方米空间4克的用量使用消毒粉进行熏蒸，密闭门窗2天后启用。（2）接种箱用消毒粉熏蒸，培养架用苯酚5％水溶液擦洗，注意身体防护。（3）接种室、培养室应用空调器降温25℃，降湿至70％以下。（4）发现初期污染时，将污染袋包严移出室外，对配50倍蘑菇祛病王或施保功溶液，将污染袋浸入其中2～3分钟，杀死霉菌后再行处理，不可随丢乱弃，造成二次污染。

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