[原创] 双孢菇干泡病——轮枝菌防治

南湖春

 

菌生轮枝菌的分离鉴定及有效杀菌剂的筛选

    菌生轮枝菌[Vercitillium fungicola (Pruess) Hassebrauk]是引起双孢菇干泡病[dry bubble disease of the cultivated button mushroom，Agaricus bisporus]的病原真菌，干泡病是最常见也是最严重的蘑菇真菌性病害之一。该菌寄生在双孢菇子实体上，在幼蕾期侵染会引起子实体不能正常发育而形成畸形子实体，后期侵染导致菌盖表面形成褐斑，严重影响双孢菇的产量和商品质量^[1]。国外对轮枝菌的研究报道较多^[2-4]，多种杀菌剂中以prochloraz-manganese的抑菌效果最佳，并在干泡病防治中广泛应用。国内对轮枝菌的研究较少，陈吉棣等（1981）从采自福州、三明、北京等地的病菇上，分离获得了两种轮枝菌：菌生轮枝菌(异名V.malthousei Ware,马氏轮枝菌)和蘑菇轮枝菌（V.psalliotae Tresch），对两种轮枝菌的形态作了详细描述,并对其在双孢菇上的症状和预防措施，作了比较和探讨^[5]。曹德宾（2006）介绍了生产中防治干泡病的综合措施^[6]。关于轮枝菌引起的干泡病的防治方法也见于诸多食用菌病虫害防治著作中^[7－8]，建议采用多菌灵、百菌清、代森锰锌等杀菌剂进行防治。但国内至今为止仍没有关于轮枝菌干泡病化学防治的研究资料。因此，我们从病菇上经组织分离获得病原菌，并进行了化学防治的研究。

1 材料与方法

1.1供试材料

1.1.1 供试菌株 

菌生轮枝菌：Ve1，通过组织分离从河南省新乡县采到的病菇上获得，保存于河南科技学院微生物实验室。

1.1.2  供试药剂

A.50%多菌灵可湿性粉剂（青岛益农化工有限公司）；

B.50%多菌灵可湿性粉剂（江阴市农药二厂有限公司）；

C.50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂（使百功，江苏辉丰农化股份有限公司）；

D.50%施保功（Sporgon）可湿性粉剂 (有效成分为prochloraz manganese chloride complex，安万特作物科学公司生产，广州市中龙化工有限公司分装)；

E.80%出口级络合态代森锰锌（西安近代农药科技股份有限公司）

1.1.3 培养基

PDA培养基: 马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，琼脂20g,水1000ml。121℃高压灭菌30min后备用。

1.2 试验方法

1.2.1病原菌形态观察

将菌种接种在PDA平板上，在25℃恒温箱培养7-8d，观察菌落宏观特征。挑取少量菌丝体制成水浸片，在显微镜下观察菌丝、分生孢子梗、孢子的形态，用测微尺测量大小。

1.2.4 抑菌试验

首先将轮枝菌和双孢菇母种在PDA平板上活化培养，待菌落直径长至6cm左右是用于抑菌试验。

采用琼脂平板二倍稀释法测定不同浓度梯度的杀菌剂对轮枝菌及双孢菇菌丝生长的影响，药物浓度梯度为500倍、1000倍、1500倍、2000倍。用PDA 培养基将各种药物制成一系列含药物浓度不同的平板,以不加杀菌剂的平板作对照（CK）。用d=0.6cm的打孔器来沿活化菌种的边缘取菌龄一致，且大小完全相等的菌块接种于不同药物不同浓度的平板的中心，每个药物的每个浓度设3 次重复。接种前在平板底面画“+”，便于日后的测量工作的进行。然后在25℃恒温箱中培养8-9d，当生长最快的菌落即将长满平板时终止培养，观察菌丝生长势,测量菌丝生长速度。

菌丝平均生长速度(mm/d)＝菌落直径（mm）－6mm/2×培养时间(d)

采用SPSS统计软件进行统计分析。

2 结果与分析

2.1病原菌形态观察及鉴定结果

2.1.1宏观形态

图1 轮枝菌菌落的形态  左：正面；右：背面

在PDA平板培养基上，菌丝洁白，浓密，菌落表面略带绯红的。菌落背面出现较规则的褐色轮纹。菌落形态见图1。

2.1.2微观形态

在光学显微镜下，菌丝有间隔，有分枝，菌丝直径4.5-8.5μm，分生孢子梗具有轮生分枝，一般3-4分枝，分枝向顶端逐渐变细，在顶端着生分生孢子。分生孢子单生，易脱落，圆形，椭圆形，卵圆形或短梭形，无色或微带色泽。孢子大小9～17.5μm×5～7.5μm。

2.2不同杀菌剂对轮枝菌菌丝生长的影响选用不同的杀真菌剂进行药剂抑菌效果的试验，测试不同杀菌剂对轮枝菌菌丝生长的抑制能力，从而筛选出能够控制或降低菌生轮枝菌危害的有效药剂。试验结果表明，不同杀菌剂抑制轮枝菌菌丝生长的能力有显著差异，并对不同的药剂不同的浓度做了多重比较分析，试验结果见图4、和表1。

从图4和表1可以看出，在不含杀菌剂的PDA培养基（CK）上，菌丝浓密、整齐，生长速度与其它处理间存在极显著差异。与不含杀菌剂的CK相比，5种杀菌剂对轮枝菌都有一定的作用，D₁-D₄和C₁-C₃能够完全抑制轮枝菌菌丝的生长，C₄培养基上菌丝仅有微弱生长，而且菌丝生长速度慢，菌丝稀疏。A₁-A₄、B₁-B₄ 和E₁具有相似的抑菌效果，E₂-E₄抑菌效果较差。试验及多重比较表明：抑菌效果由强到弱的顺序依次是施保功（D）、使百功（C）、两种多菌灵（A和B）和代森锰锌(E)。由于使百功(C)的市场价格远远低于施保功(D)，并且由表可知使百功1500倍液就可以完全抑制菌丝的生长。所以，5种药剂中防治由轮枝菌引起的干泡病的应首选使百功。

表1 不同杀菌剂对轮枝菌菌丝生长影响

杀菌剂及 稀释倍数		菌丝平均生长速度 (mm/d)			平均值(mm/d)	差异显著性
		I	II	III		0.05	0.01
CK	不含药	4.98	5.25	5.00	5.08	a	A
E3	1500	3.76	3.79	3.84	3.80	b	B
E4	2000	3.75	3.85	3.68	3.76	b	B
E2	1000	3.75	3.68	3.78	3.74	b	B
B3	1500	2.43	2.45	2.45	2.44	c	C
A2	1000	2.32	2.29	2.31	2.31	d	D
E1	500	2.22	2.26	2.25	2.24	d	DE
A4	2000	2.07	2.14	2.16	2.12	e	E
A3	1500	2.00	2.07	2.00	2.02	f	EF
B2	1000	1.96	1.92	1.93	1.94	f	F
A1	500	1.75	1.71	1.69	1.72	g	G
B1	500	1.57	1.68	1.70	1.65	g	G
C4	2000	1.50	1.45	1.48	1.48	h	H
B4	2000	1.42	1.36	1.43	1.40	h	H
C1	500	0	0	0	0	i	I
C2	1000	0	0	0	0	i	I
C3	1500	0	0	0	0	i	I
D1	500	0	0	0	0	i	I
D2	1000	0	0	0	0	i	I
D3	1500	0	0	0	0	i	I
D4	2000	0	0	0	0	i	I

3 小结与讨论

不同杀菌剂的抑菌试验结果表明，500-2000倍的施保功以及500-1500倍的使百功能够完全抑制轮枝菌菌丝和双孢菇菌丝的生长，2000倍的使百功能够强烈抑制轮枝菌菌丝生长， 500-2000倍的两种多菌灵和500倍的代森锰锌也有一定的抑制作用，1000-2000倍的代森锰锌的抑制效果较差。所以，对于轮枝菌干泡病的防治应以预防为主，通过对覆土进行严格消毒，或在覆土后使用2000倍的施保功或1500倍的使百功喷施，可以避免或延迟轮枝菌对双孢菇的危害。由于国产的使百功的价格远低于进口的施保功，所以，防治干泡病推荐使用的杀菌剂为使百功。

对于覆土喷施的剂量，L. Staunton（1999）报道，轮枝菌的最初侵染来源于覆土，以1.2g/m²的剂量在覆土后喷施施保功，可有效防治轮枝菌干泡病的发生，但如果喷施剂量超过9.6 g/m²将会严重影响双孢菇的生长^[9]。因此，对于轮枝菌轮枝菌的防治应以覆土消毒为主。

 

 

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易菇

来自高校的成果，多多益善！科学、实用！赞一个。

福建老菇农

试验做的很好，照片也非常清晰，难得好材料，谢谢湖南春先生。

南湖春

 

干泡病

又名轮枝霉病、褐斑病、干腐病等。病原菌主要是真菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目、丝孢科、轮枝霉属的菌生轮枝霉(Verticillium fungicola)。干泡病是蘑菇栽培中危害较严重的一种子实体病害。

1）形态特征：在PDA培养基上培养，菌丝洁白、浓密，培养基背面有红褐色轮纹。有间隔、有分枝。分生孢子梗直立、分枝，初次分枝轮生，对生或互生，二次分枝为轮生。顶层小梗下部膨大，顶端尖细，呈烧瓶状。通常有一层水膜或粘液包着呈头状簇生的小梗顶端。分生孢子单生于小梗顶端，无色、单细胞，球形、椭圆形或卵圆形
2）发病症状：蘑菇子实体被侵染所表现的症状随感病时期不同而不同。菇蕾形成初期感病的，原基僵化，菌盖、菌柄分化受阻，形成灰白色畸形组织块，小而干、不腐烂。外观与疣孢霉病引起的硬皮马勃状组织团块相似；菌盖菌柄分化期感病的开始先在菌盖上产生许多不规则针头状褐色斑点，以后斑点逐渐扩大，并产生凹陷，凹陷部分呈灰白色，充满轮枝霉菌丝及孢子，若菌柄受感染，会使菌柄加粗变褐，外层组织剥裂。病菇常干裂，长大后菌盖歪斜畸形，菇体腐烂速度较慢，不分泌褐色汁液，无特殊臭味，这是该病区别于疣孢霉病的特征之一。

3）发生规律：轮枝霉广泛存在于土壤、有机物上。被污染的覆土进入菇房是初源侵染。该菌不感染菌丝，但蘑菇菌丝能刺激病原孢子萌发。它的分生孢子可形成有粘性的粘团粘附于所接触到的任何物体上，包括昆虫、废料、采菇者手上，并从这些媒体再次传播。病原孢子在空气湿度90%以上或水中，经4-5小时即可萌发。菇体染病后经14天便出现褐色病斑。因此该病主要靠分生孢子传播危害，轮枝霉生长的最适温度为22℃。菇房高温（20℃以上），高湿（90%-95%），通风不良、土层含水量大，蘑菇菌丝长势弱，易发生此病。

4）防治措施：

①轮枝菌的初次侵染来源是覆土材料，所以应严格覆土材料的选取和消毒工作。

②菇房残留的轮枝菌孢子是再次侵染的主要来源，所以要在栽培前对菇房内外进行严格消毒。

③轮枝菌的孢子外包着极粘的粘液，所以很容易粘附在尘埃、水滴、害虫及采菇者身上，通过通风、喷水及日常管理进行传播，而且一些螨类以轮枝菌的孢子和菌丝为食，有活力的孢子则从粪粒中复活，使病菌从一个菇房传播到另一个菇房，所以应加强害虫防治。

④培养料进行后发酵处理，可以杀死培养料中的病菌和害虫，又可以提高培养料本身的质量，有利于蘑菇菌丝的生长，健壮而快速生长的蘑菇菌丝可以抑制轮枝菌孢子萌发和菌丝生长。

⑤环境条件也是诱发轮枝菌孢子萌发生长的一个重要原因，产菇期菇房温度应控制在16℃左右，当气温高于20℃时要加强通风，进行降温降湿。菇房水分管理要严格，水质要干净，喷水方法要得当，控制用水量，避免出现高湿环境。

⑥菇床上出现病菇后，应停止喷水，加大通风，及时清除病菇并深埋或烧毁，切勿乱扔乱放。在菌床通风降温后，可对发病部位喷50%多菌灵可湿性粉剂、70%甲基托布津1000倍液，或50％使百功、50％施保功(Sporgon)、45％噻菌灵（特克多，Tecto）2000倍液。

myb

一篇高质量的论文，谢谢王老师的倾情奉献！

南湖春

上面的图片有些不清晰，把原始图片再发一下，供坛友参考。