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2018第二届全国虫草大会
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天麻蜜环菌、萌发菌母种的制作方法

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论坛元老

发表于 2018-10-8 10:43:35 |显示全部楼层
  人工栽培天麻,在有性繁殖过程中,需要萌发菌和蜜环菌两种共生菌。笔者在生产实践中,摸索出两种共生菌都能生长的培养基及生产技术。具体做法如下。
  培养基配制
  1、 液体培养基
  马铃薯(挖去芽眼、去皮、切片)100g,硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g,自来水或天然水1300mL,在双重锅内煮沸30分钟后用双层纱布过滤。取滤液补水至1000mL,加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。全部溶解摇均后,分装于500mL的三角瓶或罐头瓶内,每瓶装150mL左右,也可装于试管内,装入量为试管容积的1/4。三角瓶和试管用棉花塞口,罐头瓶用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口后,用皮筋扎口。特点:技术含量高,繁殖快,长好即可应用,但不能长期保存。
  2、 固体斜面培养基
  斜面培养基是食用菌生产中常用的培养基,也按照上述操作程序制取滤液,在滤液中加入琼脂18g,加热溶化并补水至1000mL,趁热加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨5g、10mgVB1,全部溶解摇均,分装于试管内,装量为试管容量的1/4,然后用棉花塞口。
  3、 木屑培养基
  硬杂木屑50%、玉米芯(粉碎成小颗粒状)25%、麦麸15%、玉米面10%,外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、2%VB1。将原料和石膏、石灰等干料拌均,再将上述可溶解的所有辅料溶于水中并拌入原料中,使之含水量为70%,充分拌均后装入试管,并适当压实。装入量为试管容积的1/2,然后用棉花塞口。特点:耐贮藏,便于邮寄。
  灭菌
     用手提式高压灭菌锅,也可用民用高压锅代替。
  1、 液体和斜面固体培养基
  灭菌时,蒸汽压力为1.4kg/平方厘米时稳定保持30分钟,待锅内温度降到50~70℃时出锅。液体培养基出锅后直接放入接种箱中,待温度降到25℃以下时接种;斜面固体培养基需趁液体状态时倾斜成斜面(斜面长度约占试管长的3/5),待培养基自然凝固后移入接种箱。
  2木屑培养基
  灭菌时,蒸汽压力在1.4kg/平方厘米时稳定保持45~60分钟,自然降温后,出锅直接放入接种箱。
     注意:灭菌锅应事先加足水,开锅后一定要待内部冷空气排尽后再压阀,达到压力后,调小热源,维持压力。灭好菌后,降压不能过急,以防冲掉棉塞。
  接种
     必须在无菌条件下,严格按照无菌操作要求进行。
  1、 接种液体培养基
  只需从母种试管内挑取花生米大小的1~2块母种(带有菌丝的种块)接入三角瓶中。接入试管液体培养基时,种块可小一些。
  2、 接种斜面培养基
  蜜环菌需趁斜面有凝结水时接种,凝结水有利于蜜环菌萌发。每支试管斜面上接入1~3块母种;接种萌发菌时,需待培养基表面无凝结水时再接种。每支试管斜面上接入1~2块母种。
  3、 木屑培养基
  培养基灭菌后不能存放,需尽快接种。接种时,要用接菌钩适度推压种块,使其与培养基紧密接触,以利菌种萌发生长,接种后需立放。
  培养
    接种后,尽快放入恒温箱或培养室内,在22~24℃的条件下恒温培养。
  1、 液体种
  在培养过程中,从第2天开始启动摇床振荡培养;手工操作时,每天需手工摇动6~8次。如果是试管装,摇动后需斜放,7天左右即可终止培养(萌发菌比蜜环菌的培养时间要多2~3天),应尽快用于生产。成熟的培养液应是清澈透明、淡茶色或土黄色。如果浑浊、液面膜状或呈大量泡沫状即是杂菌污染,应废掉。
  2、 斜面种
  培养时需平放,48小时左右可看出菌丝萌动并逐渐向周围辐射延伸。当10~15天菌丝贯穿斜面培养基(萌发菌培养时间需长一些)时即可用于生产。置于0~4℃的冰箱内,蜜环菌可保存40天,萌发菌可保存60天。
  3、 木屑种
  接种后需竖立放置培养,防止种块振动,经15~20天培养,蜜环菌菌索或萌发菌菌丝贯穿到瓶底时,即可用于生产。置于0~4℃的冰箱内保存,6个月质量不变。经冰箱内久存的木屑菌种用于生产时,为防止接种时感染杂菌,可从试管底部破管取种接种。
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