新手，摇瓶做了7遍，均失败～～～请救高手啊
今年刚开始种菇，想做液体菌种，可是试了7遍了，都失败了，打击死了。可是试管转管做成了，真是郁闷。摇瓶操作步骤都是按照网上现成的方法做的，不知道是哪里有问题啊～～～
我用的配方：马铃署200克，硫酸镁1.5g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾3g，维B-10mg，水1000ML。第三次试验加了蛋白胨20g。
操作步骤：1、按照做试管培养基的方法，做好了液体培养基，备用。
2、抽滤瓶空灭，加管，加棉塞。121度30分钟。
3、抽滤瓶加培养基再灭，121度30分钟。
4、自然冷却（有一次2天后接种），快速接种（约2小时后接种），不管哪种都失败了。
5、超净工作台接种（有五次在这里接种），离子风接种机前接种（两次在这接种），室内有紫外线灭菌，还有烟雾消毒剂，不管哪种都失败了。
6、接种后室温静置两天，接种的菌皮菌丝开始生长，磁力搅拌机上旋转，150转/分
7、转两天液体还是混浊，转三天颜色变深，还是混浊，转四天颜色更深，第五天等不行了，第六天打开，酸了。
差不多每次都是这样，真不知道哪里操作不正确，还是～～～～～，太失败，伤自尊了！
请各位高手指教指教，谢谢～～～～～～～
是不是你的菌种存在隐性杂菌污染啊！ 只能说你无菌操作还有问题。有接种箱的话试着在接种箱里甲醛熏蒸做一次，从试管开始重做一遍。上面的配方不用加蛋白胨 接种箱里加臭氧环境 严格无菌操作你试试?再失败可能是种源问题. 坚持就是胜利 无菌操作说易不难，说难不易，细节是关键。建议楼主可以找人重复下你的实验，或者换菌种试试。。。。 换人操作试试 各位大佬，我再试，已经试过7次了，整改后，再试7次也无所谓～～～ 液体菌种的优势在于速度和一致性。缺点也很多，对于新手是不合适的。
实用为好。 我也是准新手