青岛徐安集团--食用菌菌种生产技术规程
1、菌种引进1.1 菌种引进由菌菇中心按公司安排的生产计划提出所需菌种的引种申请，经公司审批同意后在具备母种和原种《食用菌菌种生产经营许可证》的单位引进菌种；1.2 引进的菌种经验收合格后予以登记（见《菌种资源登记表》）；1.3菌种验收主要检验菌种的包装、标签、标志、种性、活力、纯度六个方面的内容；1.3.1 包装1.3.1.1母种外包装采用木盒或有足够强度的纸材制作的纸箱，内部用棉花、碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满；1.3.1.2原种、栽培种外包装采用有足够强度的纸材制作的纸箱，内部用碎纸、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。纸箱上部和底部用8厘米宽的胶带封口，并用打包袋捆扎两道，箱内附产品合格证书和使用说明（包括菌种种性、培养基配方及适用范围）。1.3.2 标签1.3.2.1 产品标签 每支（瓶、袋）菌种要贴有清晰注明以下要素的标签：产品名称；品种名称；生产单位；接种日起；执行标准。1.3.2.2包装标签 每箱菌种要贴有清晰注明以下要素的包装标签：产品名称、品种名称；厂名、厂址、联系电话；出厂日期；保质期、贮存条件；数量；执行标准。1.3.2.3包装储运图示标志 包装储运图应注明以下图标：小心轻放标志；防水、防潮、防冻标志；防晒、防高温标志；防止倒置标志；防止重压标志。1.3.3母种的质量要求1.3.3.1感官要求1.3.3.1.1容器：完整，无损；1.3.3.1.2棉塞或无棉塑料盖：干燥、结晶，松紧适度，能满足透气和滤菌要求；1.3.3.1.3培养基灌入量：为试管总容积的1/4~1/5；1.3.3.1.4培养基斜面上端距棉塞的距离：40~50毫米；1.3.3.1.5接种块大小：一般要求3~5毫米×3~5毫米；1.3.3.1.6菌丝生长量：长满试管；1.3.3.1.7菌丝体特征：不同食用菌种类其菌丝体在试管斜面上的特征（菌落特征）不同，描述菌落特征包括颜色、长势、边缘是否整齐等；1.3.3.1.8菌丝体表面：一般要求均匀、舒展、平整、无角变、无拮抗现象；1.3.3.1.9菌丝分泌物：不同食用菌要求不同；1.3.3.1.10杂菌菌落：不论何种食用菌，母种都不可有杂菌菌落；1.3.3.1.11子实体原基：除猴头外，所有母种都不允许有原基。1.3.3.1.12气味：有菌种特有的清香味，无酸、臭、霉等异味。1.3.3.2纯度要求1.3.3.2.1纯培养是菌种质量的基本要求，是必须达到的；1.3.3.2.2不论什么食用菌，其母种都应该是纯培养，不能混有细菌、酵母菌、霉菌、螨虫、线重灯任何其他生物。1.3.3.3活力要求1.3.3.3.1衡量母种活力的方法，主要是从菌种的外观进行判断检查；1.3.3.3.2体现母种活力的指标包括感官要求和菌丝生长速度（即长满试管所需的天数）。1.3.4原种的质量要求1.3.4.1感官要求1.3.4.1.1容器：完整，无损；1.3.4.1.2棉塞或无棉塑料盖：干燥、洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求。1.3.4.1.3培养基上表面距瓶口的距离：50±5毫米；1.3.4.1.4接种量（每支母种接原种书，接种物大小）：≥12毫米×15毫米；1.3.4.1.5菌丝生长量：长满容器。1.3.4.1.6菌丝体特征：表现出品种的菌丝体颜色、长势、菌丝前沿的特征。1.3.4.1.7表面菌丝体：生长均匀，无角变，无高温抑制线；1.3.4.1.8菌丝分泌物：允许有少量无色或棕黄色水珠；1.3.4.1.9杂菌菌落：无；1.3.4.1.10拮抗现象：无；1.3.4.1.11子实体原基：无或少量原基；1.3.4.1.12气味：特有的清香味，无酸、臭、霉等异味。1.3.4.2纯度要求（同母种）1.3.4.3活力要求1.3.4.3.1衡量原种活力的方法，主要是从菌种的外观和长满瓶（袋）所需的天数进行判断检查；1.3.4.3.2外观判断的内容有：菌丝形态、萌发快慢、萌发菌丝的稀密、生长的整齐程度、菌丝的丰满程度、发菌程度、分泌物、色素、脱壁的有无、菌皮的有无及薄厚等；1.3.4.3.3菌丝稀疏、分泌物（黄水）多、菌丝自溶、原基大量形成、菌皮厚、培养料与瓶壁明显分离等现象都是低活力菌种的表现。1.3.5栽培种的质量要求1.3.5.1感官要求1.3.5.1.1容器：凡用于生产原种的容器，在栽培种生产中都可以使用，另外，也可选用≤17厘米×35厘米耐126℃高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都要使用棉塞，棉塞要使用梳棉，不可使用脱脂棉；也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。1.3.5.1.2感官要求 与原种基本相同，只是有的种类原基的有无和量稍有改变。1.3.5.1.3纯度和活力要求 与原种完全相同1.4引进的菌种应在3天内进行复壮、提纯、扩繁和保存；2、菌种的生产2.1菌种的生产流程（见下图）2.2母种的制作2.2.1培养基的制备2.2.1.1 母种培养基主要用于菌种分离、扩大、保藏。一般用试管作为容器，所以称为试管斜面培养基。 2.2.1.2培养基的配制2.2.1.2.1.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基） 马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.2.1.2.1.2综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基（CPDA培养基） 马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.2.1.2.1.3马铃薯麦麸综合培养基 马铃薯（去皮）200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.2.1.2.1.4马铃薯蛋白胨综合培养基 马铃薯（去皮）200克，蛋白胨2~4克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.2.1.2.1.5马铃薯酵母粉综合培养基 马铃薯（去皮）200克，酵母粉4~6克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.2.1.2.2材料选择 有些材料如葡萄糖、磷酸二氢钾其成分和浓度相对稳定，有些天然有机物质如马铃薯、麦麸随不同季节、存放时间、质量优劣其成分有很大差异，影响食用菌菌丝萌发和生长，甚至还可能抑制菌丝生长。因此，使用这些材料时，要新鲜洁净，霉变、虫蛀的材料不可使用，发芽、变青的马铃薯不可使用。2.2.1.2.3准确称量 各种食用菌菌丝生长都要求适宜的养分浓度，并非养分越多越好，因此，配方中各种成分要准确称量。2.2.1.2.4材料处理2.2.1.2.4.1植物性有机物质 马铃薯、米糠、棉籽壳、麦麸、木屑、堆肥、稻草等均需先用清水煮沸30分钟浸提，取其滤液备用；2.2.1.2.4.2 生物制剂 酵母粉、蛋白胨等生物制剂使用前用温水融化，然后加入，不需要加热煮沸；2.2.1.2.4.3 化学试剂 化学试剂类营养物质（选用化学纯级试剂），如葡萄糖、麦芽糖、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁等，均在配制的最后一步加入，加入时不断搅拌使其快速溶化，也不需要加热煮沸。2.2.1.2.5 制作方法（以马铃薯酵母粉综合培养基为例）2.2.1.2.5.1 材料准备 选取没有发芽、变青的马铃薯，洗净去皮，称取200克，切成1厘米左右见方的小块。同时准确称取好其它材料。酵母粉用少量温水溶化；2.2.1.2.5.2 热浸提 将切好的马铃薯小块放入1200毫升左右水中，煮沸后用文火保持30分钟；2.2.1.2.5.3 过滤 煮沸30分钟后用4层纱布过滤；2.2.1.2.5.4 琼脂融化 若使用琼脂粉事先溶于少量温水种，然后倒入培养基浸出液中融化。若使用琼脂条可先剪成2厘米长的小段，用清水漂洗2次以除去杂质。煮琼脂时要多搅拌，直至完全融化；2.2.1.2.5.5 定容 琼脂完全融化后，将各种材料全部加进液体种，不足时加水定容至1000毫升，搅拌均匀；2.2.1.2.5.6 调节pH值 定容后，用pH试纸测定培养基的pH，pH偏高，可用柠檬酸或醋酸降低；pH偏低，用氢氧化钠、碳酸钠或石灰调高。2.2.1.2.5.7 分装 选用洁净、完整、无损的玻璃试管。调节好pH后就可以进行分装。食用菌常用的玻璃试管是18毫米×180毫米和20毫米×200毫米两种规格。分装时，试管垂直桌面，注意不要使培养基残留在近试管口的壁上，以免日后污染。一般培养基装量为试管长度的1/5~1/4。分装完毕后，塞上棉塞。棉塞选用干净的梳棉制作，不能使用脱脂棉。棉塞长度为3~3.5厘米，塞入试管内1.5~2厘米，外露部分1.5厘米左右，松紧适度，以收体外露部分棉塞试管不脱落为度。然后7支捆成一捆，用双层牛皮纸将试管口一端包好扎紧。2.2.1.2.5.8灭菌 灭菌是试管培养机制备的重要环节。灭菌彻底与否，关系培养基制备成功和失败。灭菌前，先检查锅内水分是否足量，如水分不足，要先加足水分，然后将分装包扎好后的试管直立放入灭菌锅套桶内，盖上锅盖，拧紧螺丝，关闭放气阀门，开始加热。当压力表指针达到0.05兆帕时，维持在此压力30分钟后关闭热源。当压力表降至0后，打开放气阀门，排出锅内气体，慢慢打开锅盖。2.2.1.2.5.9摆放斜面 打开锅盖后，如果立即摆放斜面，由于温差过大，试管内易产生过多的冷凝水。所以，为防止试管内形成过多的冷凝水，不宜立即摆放斜面。一般情况下，高温季节打开锅盖后自然降温30~40分钟，低温季节自然降温20分钟后再摆放斜面。斜面的长度以斜面顶端距棉塞40~50毫米为标准。斜面摆好后，在培养基凝固之前，不能再行摆放。2.2.1.2.5.10灭菌效果检查 从制成的试管斜面种，随意抽取20支置于培养箱内，28℃恒温培养48小时，检查灭菌效果。培养后培养基上无微生物发生，表明灭菌成功，即可使用。没有用完的试管斜面用纸包好，保存在清洁干燥处，以后随时可用。2.2.2接种2.2.2.1接种室和接种箱的消毒处理 在使用前一天，用药物熏蒸消毒处理接种室。熏蒸药物一般选择甲醛+高锰酸钾和气雾消毒剂。甲醛和高锰酸钾的用量为每立方米7~8毫升甲醛加5克高锰酸钾。使用前，先将门窗关闭，然后将适量的高锰酸钾放在大烧杯和盆内，操作人员戴上口罩倒入相应量的甲醛，快速出室关门。熏蒸12小时后使用和甲醛等量的氨水中和空气中的甲醛后，在进行接种，其使用时间要在3~5小时进行。气雾消毒剂的使用方法要严格参照使用说明书。 不错，挺详细的。 做培养基马铃薯去皮是脱裤打屁，毫无必要，呵呵。再有在母种培养基中加什么酵母粉、蛋白质之类也基本没必要。再有，那个加100克麸皮的配方是想当然瞎写的。再有，分装试管1/5也是瞎写的。总的来说，母种培养基养分不能太高，一般PD(G)A足够，当然，考虑到母种生产和下一级菌种生产的时间衔接，琼脂量可加到千分之二十五。
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