[原创]多脂磷伞产业化栽培工艺流程的研究

myb 发表于 2009-8-17 14:43:29

多脂磷伞【PhoIota.adiposa（Fr）QuèI】，别名黄蘑、柳蘑、刺儿蘑，为我国北方比较著名的食用菌，属担子菌亚门、层菌纲、球盖菇科、磷伞属，为典型的木腐菌。在吉林省，多在秋季生于杨柳及桦的树干上，单生或丛生，目前很少进行商业化栽培，尚未形成产业化生产。
多脂磷伞营养价值十分丰富，富含蛋白质、矿物质和维生素，其口感爽嫩，风味独特，内含18种氨基酸，其中人体必需但又不能自身合成的八种氨基酸较一般菇类丰富，并且由于呈味物质的含量较高，味道十分鲜美，诱人食欲，加之其自身脆嫩适口的特性以及其自身的珍稀特性，无论冷调热炒，或汤或菜，甚至做馅，均可显示出它独特的口感及口味，尤其是该菇晒干后呈金黄色，有浓郁的菇香，备受消费者欢迎，是我省东部山区当地居民一道季节性很强的稀有美味佳肴。
有关多脂磷伞药用价值的研究，我国不够深入。日本的桥冈良夫与有田郁夫对多脂磷伞子实体表面的一层粘质，经盐水、碱溶液、温水或有机溶剂提取得到多糖体甲，该多糖体对小白鼠肉瘤180和艾氏腹水癌的抑制率达80～90%。国内对多脂磷伞的粘性物质也进行了生化分析，证明这是一种不可多得的核酸类物质，对恢复和增强人体精力以及恢复和提高体力等均具有重要作用。另外有报道多脂磷伞还可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌和肺结核杆菌的感染。可以说，多脂磷伞是一种集营养、疗效于一体的商品价值较高的珍稀美味食用菌，极具开发生产和商业潜力。
值得肯定的是，科研人员于1998年在长白山自然保护区采集到野生多脂磷伞，并经东北师范大学赵大明教授鉴定，确证无误为多脂磷伞，并着手进行人工代料栽培，历经三年，于2001年栽培获得了成功，并且使其产量超过了传统的滑菇，使其生物转化率达到了80%以上，并且比滑菇生产周期缩短了一半以上，并且摸索出了一套行之有效的代料栽培产业化生产技术，在国内达到了领先水平。由于传统滑菇烹饪方法单调，市场需求量在逐年减少、价格降低，而多脂磷伞烹饪花样繁多，口感独特、味道鲜美，是一种有可利用价值的商品，尤其是可补足滑菇的淡季，因此，人工栽培有极大的潜力。
一、        菌种分离纯化
人工栽培时，将食用菌的双核菌丝接种于适宜的基质上，菌丝便可发育成菌丝体，以至子实体，这种双核菌丝体便是一种“菌种”，它是人工栽培的前提。纯度高、活力强的多脂磷伞菌种是栽培取得优质丰产的先决条件。
（一）采样地的生态调查及样本的收集与鉴定（见表）
真菌标本记载表                    样本编号：1998.8.24
<table cellspacing="0" cellpadding="0" border="1">
<tbody>
<tr>
<td valign="top" width="672">
标本名称：多脂磷伞（又称刺儿蘑、黄蘑、柳蘑）  
采集地点：长白山自然保护区
学    名：Pholiota.adipose.(Fr)QuèI
寄主名称：杨树
生长环境：针阔混交林带，阴坡山地上，土壤PH值6.5～7.0，环境温度（昼夜）13～28°C。
标本采集部位：阔叶树，杨树木桩上。
树木受害情况：树桩基本腐朽，杂斑状褐腐朽，剖面有白色菌丝。
形态特征：外观有白色菌丝延伸至树桩木质部，黄白色菌丝浸润整个树桩，尤其是木桩形成层菌丝较明显，靠近树桩基部有大量子实体形成。
子实体形态特征：子实体单生或丛生，菌盖直径为3～12㎝，初扁半球形，边缘常内卷，后渐平展，很粘，谷黄色、污黄色或黄褐色，有褐色近平伏的鳞片，中央较密，菌肉白色至淡黄色；菌褶黄色至锈褐色，直立或近弯生，稍密，不等长，菌柄长5～15㎝，粗0.5～3㎝，圆柱形，与菌盖同色，有褐色反卷的鳞片，粘或稍粘，下部常弯曲，纤维质，内实；菌环淡黄色，膜质，生于菌柄上部易脱落；孢子印颜色为锈色。
采集人：毛玉帮  石宝国  
采集时间：1998年8月24日
鉴定人：赵大明                </td></tr></tbody></table>

myb 发表于 2009-8-17 14:44:14

（二）菌种的分离纯化工作
1、  分离方法：采用组织分离法、孢子分离法（多孢）二种方法。
培养基配方为改良PDA培养基配方：杨柳木屑100克、葡萄糖20克、琼脂25克、酵母膏1克、蛋白胨2克、马铃薯200克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、VB15～6片、水1000ml、PH值自然。
培养温度为24～27°C。
2、  纯化措施：采用组织分离法、孢子分离法进行分离。
组织分离法：分离时将鲜菇去掉泥沙或污物，移到无菌室，在无菌条件下，用75%酒精擦试菇体表面，用解剖刀取菌盖与菌柄交接处的一小块组织，移接到改良PDA斜面培养基上，塞上棉塞，在适宜温度下培养3天，可见组织块上长出绒毛状菌丝，及时取其菌丝尖端，移接到其它斜面琼脂培养基上，反复移植几次，取其生长力最强的作母种考核用。
孢子分离法：在无菌条件下，用接种针沾取少量收集到的孢子，在改良PDA斜面培养基上自下而上划线，在划线时不要太用力，以能划破培养基表面为度，接种后塞上棉塞，置适温下培养，待孢子萌发后，挑选萌发早、生长旺盛的菌落，转接到新试管斜面培养基上再行培养即可。
（三）菌种的命名依据：以多脂磷伞菌在分类学上拉丁文名称的字头，即PhoIota.adiposa（Fr）QuèI的Pa为命名的基础再加上从不同编号菌样中筛选最佳者的顺序号而排列之，即Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ……
初筛菌株确定命名为Pa－I菌株，再经复壮以及通过抗老化（稳定性）试验和栽培考核后，再附以筛选顺序号（A、B、C、D…H…），最终确定应用菌种为Pa－I·H。
一、        菌种生产工艺流程及标准制定
斜面菌种（母种、一级种）→原种（二级种）→生产种（栽培种、三级种）
（一）母种菌种标准及生产技术规范
1、  应用菌种：Pa－I·H菌株。
2、 菌种质量标准及检验方法
（1）外观形态标准：菌丝棉绒状，较短，气生菌丝不繁茂，最初白色后变淡黄色，有黄褐色色素，在24～26°C下培养10～12天，可长满斜面。
（2）镜检：挑取少许菌丝体，放在载玻片上，加蒸馏水一滴，盖上盖玻片，在600～900倍镜头下观察，菌丝透明，呈分枝状，有横隔，锁状联合明显。
（3）测定菌丝生长速度：将经分离获得的菌丝体块，置具PDA培养皿中央24～26°C培养，待菌丝向四边辐射蔓延时，用测微尺每隔24小时测定菌落直径，直至菌落覆盖全皿为止，从而求出菌丝平均生长速度，如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力，则表明为优良菌种；若菌丝生长缓慢或长速特快、稀疏无力、参差不齐、易于衰老，则表明是劣质菌种。
（4）吃料能力鉴定：将菌种接入最佳配方的原种培养料中，置适宜的温湿度下培养，一周后，如果菌种块能很快萌发，并迅速向四周和培养料中生长伸展，则说明该品种的吃料能力强；反之，菌种块萌发后生长缓慢，迟迟不向四周和料层深处伸展，则表明该菌种对培养料的适应能力差。
3、 母种生产技术规程
（1）生产母种之前必须做出菇鉴定，不符合母种质量标准的不准投入生产。
（2）母种转试管培养基次数不超过5～7次，否则必须进行提纯复壮。
（3）培养基配制：
①配方：马铃薯200克、杨柳木屑（或树皮）100克、葡萄糖20克、琼脂25克、蛋白胨2克、酵母膏1克、磷酸二氢钾3克、硫酸镁2克、VB16片、水1000ml、PH值自然。
②配制方法：按配方精确称量各种营养物质，将马铃薯去皮挖眼，洗净，切成小方块（约1～1.5㎝左右），按规定量定量称取，加水1000ml，进行煎煮，煮到熟而不烂，用四层纱布过滤取汁，再放入琼脂，边加热边搅拌，待琼脂完全溶化后，用湿纱布（二层）迅速过滤，取滤汁补足1000ml，再加其他营养物质煮沸，充分溶解后分装试管，分装试管时，要用玻璃漏斗进行分装，尽量避免培养基粘附管口，如培养基不慎粘着管口和管壁，要用纱布擦净，以免培养基粘住棉塞而引起污染。斜面培养基装量为试管（20×200ml）长度的四分之一。培养基分装好后，均要塞上棉塞，棉塞用普通棉花制作，不宜使用脱脂棉，棉塞的大小、松紧要与试管口径相称，塞入试管的棉塞要紧贴管壁，不留缝隙，松紧度以提起棉塞而试管不脱落，拔出棉塞有轻微的声音为适宜。标准的棉塞应是塞头略大，不易变形，入管的部分占塞总长的三分之二，外露三分之一为宜，然后按七支试管的数量捆住一捆，棉塞外包扎牛皮纸或双层报纸，以防棉塞受潮。
（4）灭菌：将装培养基的试管置于高压灭菌锅中进行灭菌。装锅时，试管均要立放，切勿倾斜或平置，蒸气压力1.2kg/㎝2，温度达121°C，保持30分钟，灭菌后，让其压力和温度自然下降以后，取出培养基按要求摆成斜面，斜面长度以不超过空白管的三分之二为宜，培养基冷却凝固，即成斜面培养基，放在25～28°C条件下，空白培养1～2天，检查无污染后备用。
（5）接种：母种的接种操作一定要严格按照无菌操作规程，母种接种必须在接种箱或超净工作台中进行。接种箱或超净工作台使用前用2%来苏儿或0.1%新洁尔灭擦试，并用甲醛或过氧乙酸熏蒸消毒。甲醛用量为每立方米17ml，加入14克高锰酸钾混合熏蒸；若用过氧乙酸，则每立方米空间用15ml，再加入8ml75%酒精混合后加热熏蒸。接种前一小时打开紫外线灯照射，接种人员进入接种室则必须更换衣帽，接种前双手用75%酒精棉球擦试，然后点燃酒精灯，接种工具要在酒精灯火焰上方，严格灼烧。接种时，将一支斜面母种与一支待接斜面培养基试管放在左手掌心，再用手指夹紧试管，右手拿接种针，将管口棉塞拔出，试管在火焰上灼烧2～3秒，管口尽量靠近火焰的无菌区，将接种针迅速插入原始母种试管内，迅速挑取豆粒大小的一块菌丝体连同少量培养基，移入待接试管斜面培养基的中央。移菌时，不能让挑取的菌种接触管壁，取出接种针，将两个试管口在火焰上灼烧2～3秒，棉塞塞入试管内部分也在火焰上微燎，并迅速塞入各自试管口，一支母种可扩大转接20支左右试管。转完一支母种，所有接种工具都要用酒精灯火焰再次灼烧，双手也重新用75%酒精棉球消毒。
（6）培养：母种培养所需理化条件为温度24～26°C、湿度60～70%、光线黑暗、适当通风，经10～12天，菌丝可布满整个斜面，菌丝较浓白、粗壮，后期变淡黄色，无杂菌污染为合格菌种，即可生产使用。若不立即使用，则应放在冰箱中在4°C情况下保存备用，每隔3个月左右转管活化一次。
（7）母种必须设专人管理，详细作好档案记录，付出母种必须有严格的登记与签字手续。
（二）原种菌种标准及生产技术规范
1、 应用菌种Pa－I·H母种。
2、  原种质量标准及检验方法：
（1）外观形态标准：菌丝浓白、呈绒毛状、粗短、密齐，瓶内无米黄色积水，没有干涸收缩现象，无任何杂菌污染，生长后期，菌丝呈淡黄色，瓶壁有亮晶晶水珠贴附，并有部分菇蕾出现。
（2）镜检：菌丝着色深、粗壮、分枝多、有横隔、锁状联合明显、生长点明显可见。
（3）内观标准（破瓶检查）：具有多脂磷伞特有菇香味，菌种柱具有弹性，上下内外发育一致，颜色相同，用手将半瓶菌种掰成0.5～1㎝2体积大小时不散碎。
（4）菌种生物学标准：采用菌种柱上、中、下各部分菌种，培养在2%葡萄糖液体培养基中24～26°C下5～7天无细菌等生长，接种后在木屑、麦麸培养基上24～26°C下24～36小时内恢复生长以及48～60小时吃料，7天内无各种杂菌生长。
3、 原种生产技术规程
（1）原种必须由母种转接。
（2）原种所用容器为750ml菌种瓶，也可用500ml医用输液瓶代替。
（3）培养基配制：
①配方：小麦粒87%、石膏2%、过磷酸钙0.95%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.3%、杨柳木屑10%。
②配制方法：取干净无霉变的小麦用清水浸泡12小时后，用清水煮到熟而不烂，不开花为原则，捞出沥干水分，加入石膏等其它辅料拌匀，即可装瓶。装瓶要求上紧下松，装至瓶肩处即可，然后用干净抹布擦净瓶口内外径，使之不粘原料，然后在瓶口处塞上棉花，棉花上用牛皮纸或双层报纸扎紧。
（4）灭菌：高压灭菌1.5kg/㎝2下2.5～3小时（冷空气全部排除）。
（5）接种：接种必须在超净工作台或接种箱内进行，每支母种接5～6瓶原种。（6）培养：原种可在恒温箱中培养，数量大也可在培养室的培养架上培养，最初应竖直放置，待菌种萌发生长，向四周蔓延，菌丝封住培养基后，就应倒架改竖放为横放，横放时要经常转动菌种瓶，可调节瓶内上下水分，有利菌丝生长。菌种培养条件为温度24～26°C，但必须注意，随着菌丝生长量的增加，菌丝自身发热程度将逐步加强，另外菌丝繁衍生长过程中进行呼吸作用而产生热量，一般室温与瓶内温度往往相差1～4°C，因此，室温应控制在比多脂磷伞最适温度低2～3°C即21～22°C为宜。多脂磷伞菌是好气性真菌，培养

myb 发表于 2009-8-17 14:44:57

时应注意通风透气，除装瓶时不宜过满，瓶上部留出一定空间，有利于该菌生长外，在菌种培养室内要有适当的通风口或排风扇等机械设备进行通风，以保持培养室内空气清新无异味。由于菌种培养在固定容器内生长菌丝体，只有培养基水分适宜，培养室的湿度就很容易调控。一般要保持培养室空气相对湿度50～60%为宜。另外，在菌种培养期间，无需光线，应保持黑暗为佳。
（7）原种在24～26°C下20～25天满瓶。
（8）原种满瓶后3～20天内用完，否则应放在低温（3～6°C）、避光、干燥处保藏。
（三）生产种菌种标准及生产技术规程
1、 应用菌种Pa－I·H原种。
2、 生产种质量标准及检验方法：
（1）外观标准：菌袋无破裂，袋内全部长满菌丝，菌丝洁白，无溶菌现象，木屑米黄色，无杂菌表现，无明显积水，菌种袋壁紧贴，菌种柱上部无明显干缩，允许出现少数原基与局部黄褐色。
（2）镜检：菌丝着色深、粗壮、分枝角度大、分枝多、锁状联合发达、生长点明显可见。
（3）菌种重量标准：每袋350～420克（15×30高压聚丙烯袋）。
（4）内观检查同原种。
（5）菌种生物学标准同原种。
3、 生产种生产技术规程：
（1）生产种必须由原种转接。
（2）生产种所用容器为15×30×0.05～0.06㎝高压聚丙烯袋。
（3）培养料配制：
①配方：粉碎玉米芯或其它农产品下脚料如黄豆秆粉等40%、杨柳木屑30%、玉米面20%、麦麸7%、石膏1%、白灰1%、过磷酸钙1%、含水量60～65%、PH7.0～8.0。
②配制方法：根据配方要求，先把木屑、玉米芯、石膏等拌匀，然后加入水，充分搅拌，力求拌匀，严格掌握好含水量60%～65%，堆闷2小时，让水分充分吸收后即可装袋。装袋要上下松紧一致，一般装至袋高10㎝左右（干料5～6两），将袋面压平，用直径3㎝木棍垂直打一中心洞，以便菌丝生长，培养料下层亦可得到氧气，认真清理袋口粘着物，然后封口，封口用颈圈（直径2㎝）加棉塞，上扎牛皮纸或双层报纸。
（4）灭菌：常压蒸汽灭菌100°C维持10～12小时；高压蒸汽灭菌1.5kg/㎝22～2.5小时，无论采用何种方法灭菌，必须灭菌彻底。
（5）接种：要确保无菌操作。
①接种前要净化和消毒接种室，消毒措施为每立方米空间用3～5克气雾消毒王熏蒸，并用3%来苏儿喷雾，接种前，用紫外线灯照射1小时。
②接种用工具，包括接种针、铲，要经常消毒。
③严格挑选原种和处理好原种，接种前要挑选菌丝健壮、白亮、不脱壳的无污染的适龄菌种，进接种室前要用0.1%漂白粉或0.1%高锰酸钾消毒液清洗，然后移入接种室内，每瓶原种扩大20～30袋生产种。
④要充分利用酒精灯，接种时要做到火焰封口，操作时，不能离开灯火，细心快速不能粗心大意，整个过程要做到绝对无菌操作。
（6）培养：接种后培养对菌种非常重要，要保证平衡发菌，防止菌种污染，防止菌种老化和早衰。
①及时拣出杂菌污染。
②创造一个良好的发菌环境，温度24～26°C，湿度50～60%，经常通风，保持黑暗。
（7）在24～26°C条件下，菌丝30～35天可满袋，5～7天后即可使用。
（8）生产种暂时贮藏条件：菌种长满袋后，移到低温、黑暗、通风、干燥处。
（四）多脂磷伞液体菌种标准及生产技术规程
1、 液体摇瓶菌种标准及生产技术规程
（1）菌种Pa－I·H斜面菌种作为待接菌种，选择适龄的新鲜母种。
（2）摇瓶菌种标准：
①外观形态：菌液透明、棕黄色液体、菌丝紧密地集合在一起成小菌球，味感有清香的水果味，微酸，菌球量占30%以上。
②镜检形态：菌丝粗壮、分枝较少、原生质体嗜碱性强、着色深、有横隔、生长点多见、有明显的锁状联合、无杂菌污染。
（3）液体摇瓶生产技术规程：
①培养基配方：蛋白胨1.5%、酵母膏0.1%、麦芽糖1%、葡萄糖1%、麦麸5%、磷酸二氢钾0.15%、MgSO4·7H2O0.075%、VB10.001%、PH值6.5（消前）。
②制法：按配方规定量准确称取各药品，加一定量水加热溶解，定容至规定量，麦麸加水浸煮，温火下30～40分钟，用八层纱布过滤取滤汁，充分拌匀后分装于三角瓶中（500ml三角瓶装量至200ml）塞上棉塞（棉塞处包纱布），上覆牛皮纸，置高压蒸汽灭菌锅灭菌（1kg/㎝2）30分钟，取出经检验无杂菌污染，备用。
③接种：在无菌条件下，按斜面与摇瓶之比为1：6（斜面：摇瓶）的比例接种，一般一只斜面母种可接500ml三角瓶2～3瓶。取一支带长把的铁环，环上缠绕纱布后，吸足95%酒精，点上火后套在大三角瓶瓶口上，形成一道“火圈”，阻止杂菌侵入，将斜面母种挖块后，经“火圈”中心接入瓶内。
④培养：要求培养温度24～26°C，旋转式摇床的转速为170～200转/分钟。
⑤培养终止时间9～10天。
2、 液体种子罐培养菌种及生产技术规程
（1）菌种：使用Pa－I·H经摇瓶培养的液体菌种，选用新培养的摇瓶菌种，菌龄不超过7天，菌球不能中空，不能有太多空泡。
（2）种子罐培养菌种标准：
①外观形态：基本同摇瓶菌种，只是菌球量要占50%以上、PH6.5，若菌丝已经中空，表明菌球中部菌丝已老化，部分菌丝自溶。菌丝在培养中呈絮状，菌球表面有刺，说明菌种旺盛。
②镜检：同摇瓶菌种。
（3）液体种子罐生产技术规程：
①培养基配方：葡萄糖2%、麦芽糖1%、玉米浆0.5%、酵母膏0.2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、消沫油0.1%、PH6.5（消前）。
②制法：按规定量准确称取各药品，加入适量水加热溶解、搅匀，投料量（加水后）约占罐容积的70%（经视窗口加液），扭紧封严视窗，加温至121°C，实罐蒸汽灭菌40分钟，菌检无杂菌污染，保压冷却至26°C接种。
③接种与培养：接种量为10%，将视窗盖取下，在视窗基部套上火焰圈，点燃火焰圈，迅速经视窗口将三角瓶液体种子倒入种子罐中，及时扭紧封严视窗，熄灭火焰拿去火焰圈，通无菌过滤空气，空气流量每分钟1：1～1：1.5（V/V），罐内温度为24～26°C，罐压0.5kg/㎝2，培养3～4天。
④放罐指标：有香甜水果气味，PH降至3.6～4.0，还原糖降至0.9%以下，残糖0.5～0.4%，菌丝体稠密，培养液粘度增大，菌丝量不再增加或稍有下降，镜检无空泡或空泡较少，就应及时放罐，约培养7天左右无杂菌污染，可留作菌种用。
（五）多脂磷伞菌种场的工艺标准：
1、该工艺按培养基制作       灭菌      接种      培养的程序流水作业，室内要求水泥地面，在同一水平面上，便于机械运输，四周墙壁洁净，不易沾染霉孢子，不易吸湿，保持壁上干燥且便于冲洗。
2、灭菌锅应是双门的，一门与有菌区（培养室、制作室）相通，另一门与无菌区（冷却室）相通，双门不能同时开放。
3、冷却室、接种室要求作水磨石或油漆地面，四周墙壁和天花板油漆防潮，安装空气过滤装置。冷却室配备除湿和强调冷却装置，接种室配备分体式空调机。
4、培养室要有足够的空调装置，保证高温季节能正常生产。
5、工作人员必须具备一定的微生物常识，经过严格无菌操作训练，进入无菌区前须淋浴更衣。
6、菌种灭菌后的运输工具一经运出接种室，必须灭菌或消毒后，方可进入无菌区使用。其他工具或用品也一样，冷却室、接种室、培养室均采用拉门结构，减少开关式门扇启动过程中的空气流通，整个无菌区要求密闭性能好，并可进行小区域隔离消毒。
7、保持冷却室、接种室的气压为正值，大约高出室外2.94×104～ 4.9×104帕，其中接种室气压又要大于冷却室，冷却室大于缓冲室和培养室。
8、原料仓库远离冷却室、接种室和培养室。原料特别是粮食类的原料是许多杂菌的主要菌源。
9、栽培试验场与制种场应当分开，不能在同一处或相距很近的地方，否则栽培场杂菌易传入制种厂。

myb 发表于 2009-8-17 14:45:41

10、栽培培养基制作室和实验室为有菌区，冷却室、接种室和培养室为无菌区，其中冷却室和接种室为高度洁净的无菌区，要求空气净化程度达到100级以上。
一、        多脂磷伞产业化栽培工艺流程
工艺流程：原料准备      粉碎  加辅料    搅拌      装袋（瓶）      灭菌       接种      菌丝培育      子实体培育      采收加工。
（一）栽培场地选择：多脂磷伞栽培场地选择主要依据生产企业的具体条件和该菌的生物特性来决定，其基本指标是：
1、  满足菌丝体生长的条件要求，温度24～26°C、湿度60～50%、无光照或微弱散射光、通风良好。
2、  满足子实体生长要求：温度13～32°C、湿度80～90%、有散射光、通风量大。
3、  由于菌丝培育阶段和子实体生长阶段对条件要求不一，应当菌丝培养场与子实体发生场加以分开。
4、  为获得优质高产，栽培场地应安有调温、控湿、通风设备，标准化日光温室尤佳。
5、  栽培场地要远离污染源，尤其是畜禽饲养场、化工厂，保持环境卫生良好。
6、  栽培场地必须保证水电供应。
7、  交通运输方便，以城乡接合地为佳。
（二）多脂磷伞栽培原料选择及配制
1、原料选择：在选择代料时，要根据多脂磷伞对营养物质的要求，尽量选择其适合生长的原料，其基本指标为：
（1）原料要因地制宜，就地取材，降低成本。
（2）原料要新鲜无霉烂。
（3）玉米芯、稻草、豆秆等要先行粉碎或切断。
（4）所用木屑必须是适生树种木屑，不得含松、杉、柏木屑。
2、培养料配制原理：
（1）要满足多脂磷伞菌对碳源要求。
（2）要满足多脂磷伞菌对氮源要求。
（3）要满足多脂磷伞菌对无机盐类要求。
（4）要满足多脂磷伞菌对生长素（维生素）要求。
（5）要满足多脂磷伞菌对水份的要求。
（6）要满足多脂磷伞菌对碳氮比的要求。
3、培养基配方及配制方法：杨柳木屑40%、农作物其它下脚料（如豆秆粉、玉米芯粉、葵花籽皮粉、稻草粉等）30%、玉米面20%、麦麸7%、石膏1%、白灰1%、多菌灵0.1%、磷酸二氢钾0.3%、硫酸镁0.2%、食盐0.5%、含水量60～65%。
配制方法：根据所选配方准确称量主料和辅料，先将石膏、白灰等与玉米面、麦麸混匀，再加入木屑、秸杆粉主要原料，硫酸镁、磷酸二氢钾、多菌灵等溶于水中，再与培养料拌和，拌料用水可取自来水、井水。用拌料机拌匀，要注意检查含水量，用测水仪测培养料含水量应为60～65%。
（三）装袋：
1、  选袋：多脂磷伞产业化生产可选用17×33㎝、厚0.05～0.06㎜的高压聚丙烯袋。
2、   装袋：采用装袋机装袋。装袋时要注意上下松紧一致，不宜过松、过紧，应松紧适度，装至袋高15～16㎝，每袋装干料7～8两。装完料后，拉直袋口，套颈圈、塞棉花，棉花上包扎一层牛皮纸或双层报纸。
（四）灭菌：
1、  高压灭菌法：在1.5kg/㎝2下灭菌2～2.5小时，其基本技术要求为：
（1）按照灭菌器要求的注水量，加水到指定的标度。
（2）将料袋放在灭菌器内不宜过挤，以利热蒸气流通，特别是料袋不能叠放紧压，妨碍蒸汽渗透，造成灭菌不彻底。料袋装好后，将灭菌器的盖密封，不能漏气，然后打开放气阀门。
（3）接通电源或打开锅炉的进气阀门加热。
（4）要特别注意排除锅内的冷空气，否则会造成假压，导致灭菌不彻底。排除冷空气的方法有两种。一种是当水加热沸腾后，空气由已打开的放气阀门排出，等蒸汽从气门有力地冲出后，说明冷空气已排完，可关闭气门继续加热；另一种方法是加热后不开气门，当气压表的指针上升到0.5kg/cm2时，打开放气阀门，排出冷空气，指针降至零后，再关上放气阀，继续加热。
（5）当压力上升到所需要的指标后，开始计算灭菌时间，灭菌过程中要保持压力稳定，不能忽高忽低，特别应注意安全阀门，如果安全阀失灵，当压力超过灭菌器最大的承受能力时会出现意外事故。
（6）达到灭菌要求的时间后，应关掉电源停止加热，让其自然冷却，以免在减压过程中，袋内外产生压力差，击穿塑料袋，导致污染杂菌。
（7）防止弄湿棉塞，若棉塞潮湿可在锅中烘烤一定时间再出锅。
2、  常压灭菌法：料袋在100°C情况下保持10～12小时。其主要技术要求为：
（1）灶体大小依生产规模而定，灶仓内可安放一口大铁锅，灶仓砌墙范围比锅直径宽20㎝左右，灶仓内墙壁用水泥精细粉刷，灶项圆拱形。
（2）灶仓内要有层架结构，便于分装灭菌物。
（3）具有温度测试装置。
（4）具有加水装置和观察或测试灶内水份残余多少的装置。
（5）料袋装锅时要轻拿轻放，切忌磨破袋面，造成微孔污染。
（6）料袋在灶内要竖立摆放，袋与袋之间要留有一定空隙，以利水蒸气流通。
（7）加温烧锅时要注意做到“攻头”、“保尾”、“控中间”，以最短时间达到100°C，然后稳定在100°C，快要停火时，再大火猛攻，中途要补水，防止烧干锅，补水要补热水。
（8）达到灭菌时间后，最好用余火闷12小时再出锅。
（五）接菌：
1、 菌种预处理：
（1）固体菌种要挑选适龄、健壮有力、无任何污染的三级种，用0.1%高锰酸钾浸泡1分钟或用2%来苏儿浸泡0.5分钟，移到接种室，用牛皮纸遮盖。
（2）液体菌种也要挑选适龄的、菌球数量多、无空泡、无污染的种子罐菌种，容器外壁要用75%酒精擦拭，移到接种室，用牛皮纸遮盖。
2、接种室的消毒过程：
接种前要净化和消毒接种室，清除室内杂物，用拖布拖净地面，桌面用湿布擦干净，用气雾消毒盒熏蒸，接种前开启紫外线灯1小时，以确保接种室无菌程度高，最好在使用前用5%来苏儿空中喷雾一次。
3、接种：接种必须严格实行无菌操作，而清洁卫生是无菌基础，因此，接种人员肤、发、指甲一定要干净，接种室应有专用的卫生服，一般接种室人员以3～4人一组，不宜过多，其主要技术要求为：
（1）接种人员严格按无菌操作规程进行。进入接种室前，穿上无菌工作服，工作鞋，带好口罩和工作帽，再用2%来苏儿将手浸泡几分钟，然后进入接种室。
（2）接种前，用75%酒精棉球擦手，操作时要思想集中、严格认真，尽量少走动，动作要轻，尽量减少空气波动，每次接种结束前，禁止打开门窗，避免空气污染。
（3）特别注意要在酒精灯火焰上方接种。
（4）拔出棉塞时不要用力直线上拔，应当旋转式拔出，避免造成袋内空气负压，外界空气突然进入。
（5）棉塞潮湿时应更换灭菌过的干燥棉塞。
（6）所有接种工具均要进行严格的灼烧灭菌。
（7）尽量使开袋、接菌、封口、摆放成流水作业。
（8）每隔30分钟用2%来苏儿往接种室空间喷雾一次。
（9）工作结束后，及时搬出菌袋并将室内收拾干净，如果要连续使用接种室，必须重新进行全面的消毒灭菌。
一般每袋三级种可接40～50袋栽培袋，若生产中直接利用原种，则每瓶原种接20～30袋。
使用液体菌种接种，则在无菌条件下，将塑料袋上口打开，立即将菌种液通过酒精灯火焰上方，倒入袋中，倒菌液时要撒布均匀，袋口上方的料面都要接上菌液。按完种后迅速将袋口扎紧，每袋接种量约为20～30ml。
（六）菌袋培养：
菌袋培养宜在培养室进行，培养室内的各方面条件应满足多脂磷伞菌丝生长发育的要求。培养室具体要求如下：

myb 发表于 2009-8-17 14:47:28

1、  有良好的控温、调湿、通风设施。
2、  要有遮光措施。
3、  要经严格的消毒杀虫处理。
4、  环境卫生良好，远离污染源。
5、  与出菇室相隔。
6、  根据生产实际情况进行搭架，以充分利用空间。
接完菌的袋，竖立排放在培养架上，这个期间的技术管理规程如下：
1、温度控制：温度对多脂磷伞菌发育至关重要，它关系到菌丝生长的速度，菌丝对培养基分解能力的强弱，菌丝分泌酶的活性高低和菌丝生长的强壮程度。多脂磷伞菌菌丝生长的最适宜温度为24～26°C，但在温度控制时要注意：
（1）随着培养室内菌丝生长量的增加，菌丝发热程度将逐步加强，通常以最适培养温度为基准，每5天降1°C。
（2）菌袋内菌丝在袋内小气候生长，其温度一般比外部空间高2～3°C，因此，室内控温时应当掌握在最适温度之下2～3°C为宜。
（3）菌袋培养应严格注意菌温、气温、堆温的关系，严防烧堆。
（4）菌袋培养要有冬季能升温，夏季能降温的设施。
2、湿度控制：由于多脂磷伞菌丝体是在袋内生长，只要培养基水份适宜，湿度控制就比较容易，为有效地防止杂菌侵入，培养室湿度应宜干不宜湿，空气相对湿度以50～60%为宜，在梅雨季节自然气候下湿度较大，培养室内应多撒白灰粉吸潮，最好有排湿设备。
3、空气控制：由于多脂磷伞菌是好气性真菌，在培养室内要注意通风换气，要有适当的通风设施，另外要注意空气的对流，最低限度使培养室内不气闷、无异味。随着菌丝生长，袋下部由于缺氧，菌丝往下延伸极慢，这时要在菌丝生长点上方1～2㎝处，用竹签扎眼，以加快菌丝生长速度，缩短满袋时间。
4、光照控制：多脂磷伞菌丝生长阶段不需要光线，在黑暗条件下，菌丝生长速度要比有光条件下快20～30%，并且不易半袋就现蕾，影响产量。因此，培养室要有遮光设施。
5、菌袋检查：菌袋培养头3～5天，对菌袋进行第一次粗检，主要检查菌种是否萌发成活；7～10天再检查一次，主要检查菌丝长势及污染情况；15天左右全面仔细检查一次，对轻度污染的在污染面注射30ml甲醛加50ml75%酒精混合液或2%克霉灵溶液，或者10%NaOH溶液，注射面大于污染面，注射口贴上胶布，也可将污染块挖出，撒上白灰粉，再塞上新菌种，对污染严重的给予淘汰。
在适宜的条件下，多脂磷伞固体接种30～35天可长满全袋，液体接种20～25天可长满全袋。
优质菌袋质量标准为：（1）外观检查菌丝浓白、呈绒毛状、上下均匀有弹性、粗短、密齐，袋无米黄色积水，没有干涸收缩现象，袋口往下至料面空袋处有许多亮晶晶的小水珠，无杂菌污染，生长后期，部分菌丝呈现桔黄色色素；（2）镜检菌丝着色深、粗壮、有隔、分枝多、分枝角度大，有锁状联合，生长点明显可见。
劣质菌袋质量标准：（1）袋内有活的杂菌、活的虫体等；（2）菌丝出现自溶现象；（3）菌柱干涸、脱水现象严重，且料与袋脱壁；（4）袋底有黄白色或褐色液体；（5）菌丝不呈绒毛状、无弹力。
（七）子实体培育：菌袋发满菌后即可进入出菇管理。出菇场所可选择标准化日光温室、太阳能温室，要满足多脂磷伞子实体生长发育各方面条件的要求，有控温、调湿、调光、通风设施。菇房使用前应严格消毒杀虫。消毒措施为先喷2%白灰水再用0.3%敌敌畏或敌杀死杀虫，最后用硫磺或气雾消毒盒熏蒸。
菇房消毒后，将发满菌的菌袋移入出菇房，出菇方式有两种：
1、袋顶面出菇：即将菌袋竖立排放于菇房床架上，每平方米可放置60袋，将袋面紧贴料面处，用锋利小刀环割掉，露出料面，子实体从顶面长出。
其管理具体技术规程为：
（1）温度调控：子实体生产范围为13～34°C，但优质高产的多脂磷伞子实体生长的最佳温度应为15～18°C，同时为促使菇生长整齐，产量高，每天给予7～10°C温差刺激。
（2）湿度调控：这是子实体生长最重要的因素，在温度适宜、水份满足的条件下，菌丝会扭结形成子实体原基，这时菌袋表面会出现白色或红黄色的小颗粒突起，这是水分的敏感期，也是成菇的关键时期，要保持料面湿润，严禁向原基上喷水，这时期以保湿为主，每天向地面、空间喷水数次，保持空气相对湿度85～90%，如料面干燥，菌袋内含水量低，达不到70%时，仅能向菌块上喷细雾。当明显看到小菌盖和菌柄时，已进入幼蕾形成期，菌盖长至玉米粒大小时，开始向菌料表面喷细雾，一般每天至少雾喷三次，以雾状水为准，避免大水浇灌，室内空气相对湿度达到85%，防止子实体和菌袋水分过分蒸发。随着子实体逐渐长大，进入子实体形成期，这期间需水量加大，要适当增加喷水量，多脂磷伞比其它菇需水量大，尤其是菌盖表面有一种粘液，粘液多少直接影响产量和质量，为了产生粘液要比其它菇多需一部分水。菇体充分长大但尚未开伞时，应停水一天，以防根部变黑，方便采收。
（3）通风调控：多脂磷伞属好氧类菌类，通风不良很难出菇，即使出菇也菌柄细小，畸形菇严重，因此，良好的通风可促使子实体生长整齐、色艳、肥大，明显提高产量，尤其是喷水后要加大通风次数，否则会由于湿度大，菇体会造成萎缩或软烂，良好的通风还能排除菇房中积蓄过多的二氧化碳，不仅有利于菇生长整齐，产量高，质量好，还能有效地防止病原菌的侵染，但通风要注意科学性，冬季的直冷风和夏季的干热风不能直吹菇面，尤其是菇蕾，否则会导致严重的死菇现象，通风也不要太急，要缓慢通风，以防菇受到刺激而死亡。通风的设置也要科学，既要有进风口也要有出风口。
（4）光线调控：多脂磷伞子实体生长期需要充足的散射光，增加光照，有利于菇体进行蒸腾作用，提高新陈代谢活动，使菇体肥大、色艳、产量高、质量好，但不需要直射光，直射光直射料面会导致失水严重，保持不了菇体生长所需的潮湿环境，影响产量，甚至导致阳光中的紫外线杀伤菌丝，导致菌丝死亡，造成不出菇现象。一般多脂磷伞子实体生长阶段适宜光照强度300～500勒克司，每天保持8～10小时即可。
2、脱袋覆土出菇：脱袋覆土出菇技术是提高产量，改善菇质，防止杂菌的先进技术。其方法是，菌袋发满后，达到生理成熟后，即可脱去袋膜，竖排在阳畦中，阳畦一般宽70～100㎝、深25～30㎝，长度不限。阳畦设在日光温室内，畦床做好后用0.3%敌敌畏杀虫，再用3%来苏儿喷洒，在畦面及四周薄薄铺一层白灰粉。将袋竖立排放，袋与袋之间留1㎝距离，中间空隙用营养防杂土填满（营养防杂土配方为每百斤土中加白灰2%、草木灰1%、尿素0.3%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.2%、磷酸二铵0.1%），袋上端覆1～2㎝厚营养防杂土。其温度、通风、光线管理同袋顶面出菇，只是水份管理较袋顶面出菇简便得多，覆土后每天保持土层湿润，但不能浇透水，待菇蕾长出后，不得往菇蕾喷水，随着菇体长大，可往菇体上喷雾状水。
（八）采收：在正常情况下，菌袋生理成熟至出菇大致在5～7天，从原基分化到子实体成熟一般在７～10天，待菇体菌盖长至3㎝以上，菌盖边缘厚，没开伞，长至8～9分熟时，就应及时采收，由于多脂磷伞多数为丛生，各个菇体之间相互联连，所以采菇时，不要采大留小或单棵采，单棵采菇在附近的菇就不能生长，要一次性采收。采收一定要及时，开伞后产品质量下降，会严重影响经济效益，因此，要密切注意菇体变化，发现够采收的要立即采下来，否则会影响产品质量。
采完第一潮菇后，将菌袋上的死菇、残柄消除干净，停水3～5天，适当通风，使菌块表面干燥，温度提高到25～27°Ｃ，使菌丝恢复生长，吸收积累养份。为了补充因出菇菌袋损失掉的养份，这时，可往菌袋上喷0.1%白糖水、0.1%尿素水、稀淘米水，补充营养，还可喷洒1PPm的三十烷醇等生长素或其它食用菌生长素，促使菌丝恢复增殖，脱袋覆土出菇的可直接在畦面上灌上述营养液。
停水期过后，往菌袋上面料面上喷水，使其含水量达到75%后，转向地面空间及四周喷水，使空气相对湿度保持85～95%。脱袋覆土出菇的可在畦面灌透水，3～5天后可出第二潮菇，管理同上。一般多脂磷伞在正常情况下可出三潮菇，三潮菇的产量比例为4：3：3，袋顶部出菇的生物转化率可达60～80%，脱袋覆土出菇的可达100%以上，周期为3～4个月。
（九）多脂磷伞子实体质量标准：
1、一级菇标准：菌盖直径3～5㎝，扁平球形，边缘内卷，有较厚的粘液，谷黄色，有褐色近平伏的鳞片，数量较多，菌肉白色，菌褶白色，直生；菌柄长2～3㎝，圆柱形，有褐色反卷的鳞片，较粘；无杂质、子实体无虫蛀、腐坏现象，大多为5～6分成熟菇。
2、二级菇标准：菌盖直径5㎝以上，边缘稍内卷，较厚、较粘，污黄色至黄褐色，有褐色近平伏的鳞片，菌肉淡黄色，菌褶褐色，菌柄长3㎝以上，圆柱状有褐色反卷的鳞片，稍粘，基部无杂质，子实体无虫蛀、腐坏现象。
大多为8～9分成熟菇。
3、次品菇标准：菌盖较薄，边缘反卷，鳞片脱落，菌褶锈褐色，菌柄细长，粘质较少，基部有杂质，部分有虫蛀现象，多为采收过晚、管理不善所致。

生态无极 发表于 2009-8-17 14:58:50

好文章！介绍的很详细。

波浪发表于 2009-8-17 23:37:55

写得很好，我也很想试种，能不能发一些图片来参考吗？

myb 发表于 2009-8-18 07:30:45

十分遗憾，多次传照片都失败了，有机会一定上传。

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[原创]多脂磷伞产业化栽培工艺流程的研究