平菇失败的经历，请多指教！
今天有幸到食用菌网。前段时间我一直在苦心研究平菇的母种生产，但都失败了好几次。在大学里面有个实验课就是生产平菇，用的是马铃薯琼脂培养基。但我回忆起我的实验，按照过程都失败了，请各位老师赐教！我用的是营养琼脂，北京奥博星生物技术公司生产，主要成分为：胨10g/l氯化钠5g/l琼脂20g/l肉浸粉10g/l。与马铃薯琼脂培养基有区别。过程：取营养培养基4.5g加入100ml蒸馏水中，加热煮沸溶解，分装在试管内。在高压锅内灭菌20分钟后，利用高压锅余热将试管蒸气烘干。取新鲜的平菇，切菇柄的凹部利用酒精灯火焰接种到灭菌后装有琼脂的斜面试管中。观察：室内温度在20到23度之间，第二天，在试管内接种的斜面上有些和琼脂颜色相当的孢子团，不是白色丝状物。第三天观察孢子团开始占据整个斜面。一周内，淡黄色的东西包满试管。证明我实验失败。自我总结：灭菌不良，可能更重要的是我的操作思路上存在不足。请各位老师赐教！ <p>别相信所谓营养琼脂,用土豆就行.</p><p>你的配方是培养细菌的,食用菌,不需要食盐,喜欢糖.</p> 同一种菌类培养基的配方虽然有多种多样，但必须含有各种菌丝生长所需要的养分、水分和适宜的酸碱度。马铃薯、葡萄糖、琼脂作为各类母种的培养基最为普遍，菌丝都能正常生长。现将常用的培养基配方和配制方法举例介绍。<br/>1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)<br/>马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g <br/>琼脂 20g 水 1000mL<br/>pH值 自然<br/>2.马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA培养基)<br/>马铃薯(去皮) 200g 蔗糖 20g <br/>琼脂 20g 水 1000mL<br/>pH值 自然 <br/>以上两种培养基广泛应用于各种菇、耳、猴头类食用菌的培养。其具体制作方法是：将200g马铃薯去皮，去芽眼，切成小条放入铝锅中，加入1000mL水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯软而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至1000mL，加入琼脂熔化，再加入糖搅拌均匀，趁热分装于试管中。<br/>3.马铃薯半合成培养基(一)<br/>马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖 20g <br/> 磷酸二氢钾 3g 硫酸镁 1.5g <br/> 维生素B1 100mg 琼脂 20g <br/>水 1000mL pH值 5.8～6.2<br/>此配方制作方法与PDA培养基相同。不过加入部分化学药品，应在过滤后加入。适用于香菇菌种保藏用，也适于培养平菇、双孢蘑菇、滑菇、金针菇、灵芝和猴头等母种用。<br/>4.马铃薯半合成培养基(二)<br/>马铃薯(去皮) 200g 葡萄糖(蔗糖) 20g <br/> 玉米粉 30g 黄豆粉 10g<br/>酵母膏 2g 磷酸二氢钾 1.5g <br/>硫酸镁 0.5g 琼脂 20g<br/>水 1000ml pH值 自然<br/>此配方适合各种菇类。制作时应注意：黄豆粉与马铃薯同时下锅，煮15分钟后再加入玉米粉，以免起糊影响过滤。<br/>5.合成培养基(一)<br/>蛋白胨 2g 葡萄糖 20g <br/>磷酸氢二钾 1g 硝酸铵 1g<br/>磷酸二氢钾 0.46g 硫酸镁 0.5g <br/>琼脂 20g 水 1000mL<br/>6.合成培养基(二)<br/>葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 0.5g <br/>氯化钠 0.2g 碳酸钙 2g<br/> 琼脂 20g 水 1000mL<br/>酵母汁(1：10) 100mL 硫酸镁 0.2g <br/>将上述原料分别放入锅内，加水放入琼脂加热，并经搅拌熔化后即可分装试管。此配方适合双孢蘑菇、平菇、金针菇、滑菇等菌种培养。<br/>7.蛋白胨葡萄糖培养基<br/>蛋白胨 10g 葡萄糖 10g<br/> 琼脂 20g 水 1000mL<br/> pH值 5～5.5<br/>将琼脂放入1000mL溶液中煮熔，再加入其他营养物后搅拌溶解，即可分装试管。主要用于竹荪母种培养。<br/>8.葡萄糖蛋白胨培养基<br/>葡萄糖 30g 蛋白胨 15g<br/> 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁 0.5g<br/>琼脂 20g 水 1000mL<br/>制作方法同上，主要用于茯苓母种培养。<br/>9.苹果汁培养基<br/>苹果 100g 蛋白胨 2g<br/> 蔗糖 20g 琼脂 20g<br/>水 1000mL pH值 自然<br/>将苹果洗净，切片，放入锅内加水1000mL，煮沸20分钟，过滤后取滤汁倒入锅内，补水至1000mL，然后加入琼脂熔化，加糖搅拌均匀即成。主要用于草菇母种培养。<br/>10.棉籽壳汁培养基<br/>新鲜棉籽壳 250g 葡萄糖 20g <br/>琼脂 20g 水 1000mL<br/>取棉籽壳煮汁1000mL，加入其它营养成分即成。适合猴头、黑木耳等代料栽培的母种培养。 <br/>11.米粉培养基<br/>大米粉 50g 葡萄糖 15g<br/> 蔗糖 15g 琼脂 20g <br/>水 1000mL pH值 自然<br/>12.玉米粉汁培养基<br/>玉米粉 40g 蔗糖 10g<br/> 琼脂 20g 水 1000ml <br/>将玉米粉放入锅内，加水煮至70℃，保持60分钟，用纱布过滤，取滤汁1000mL放入锅内，先后加入琼脂和糖溶解即成。主要适用于木耳、香菇、双孢蘑菇和金针菇等母种培养。<br/>13.马铃薯淀粉培养基<br/>马铃薯淀粉 40g 葡萄糖 10g<br/> 蛋白胨 5g 磷酸二氢钾 0.5g <br/>氯化钠 5g 琼脂 20g <br/>水 1000ml<br/>将淀粉用凉水化开，加热煮沸，再加琼脂与蛋白胨熔化后，其它成分加入搅拌即成。适于银耳芽孢萌发，又适于银耳纯菌丝培养。<br/>14.豆芽汁培养基。<br/>黄豆芽 200g 葡萄糖 20g<br/> 琼脂 20g 水 1000mL<br/> pH值 自然<br/>将黄豆芽洗净放入1000mL水中煮20分钟，过滤取汁，补至1000mL，加入琼脂煮熔，葡萄糖放入锅内搅拌均匀即成。主要适用黑木耳，猴头、平菇等菌种培养。在缺乏马铃薯的季节，可代替PDA培养基。<br/>15.胡萝卜琼脂培养基<br/>胡萝卜 100g 琼脂 18g～22g <br/> 水 1000mL pH值 自然<br/>胡萝卜切条加水文火煮沸20分钟后滤汁，熔化琼脂即成。适用于培养真菌，菌丝生长优于PDA培养基。<br/>16.葡萄糖蛋白胨奶粉培养基<br/>葡萄糖 40g 蛋白胨 10g<br/> 全脂奶粉 5g 蒸馏水 1000mL<br/> pH 6.8<br/>适合于培养冬虫夏草菌。 <br/>将上述培养基配制好后，趁热倒入大的搪瓷漏斗中，打开弹簧夹，让培养基液顺橡皮管流入试管内。装入量为试管总长的l/50装好后，随即关闭弹簧夹。然后将分装的试管，再塞上大小均匀，松紧适中的棉塞。棉塞总长约4cm～5cm，一般要求3/5留在管内，其余2/5露在管外(图4—7)。最后把塞好棉塞的试管，每7～10支扎成一把，用牛皮纸包住皮筋扎紧，放入手提式高压灭菌锅内，1.5kg／cm2灭菌20分钟，冷却达70℃左右从锅内取出，趁热摆好斜面，一般斜面长度达试管全长的1/2为宜。<br/>最后，把斜面培养基放在30℃的条件下，空白培养1～2天，检查确无污染杂菌，便可使用。 <strong>母种培养基灭菌法<br/></strong>母种培养基灭菌一般用手提式高压锅。灭菌时将试管7～10支扎成一捆，再用防潮纸或牛皮纸包住试管棉塞，管口朝上，防止灭菌时棉塞潮湿。高压灭菌的时间，在1.2kg～1.5kg/cm2压力下保持15～20分钟即可。但在使用高压锅灭菌时还应注意如下事项：<br/>1.灭菌时锅中水要放至水线为止。如放水过少易引起烧干及烧焦培养基；如放水过多，棉塞易潮湿，以后易感染杂菌。<br/>2.锅内的冷空气必须排除干净，否则达不到灭菌的温度。排除锅内冷空气的方法有两种，一是将灭菌锅升火后，从开始出气起，经5分钟左右的排气，至从排气阀出的气达到直喷时，再关闭排气阀；另外一种是将排气阀关闭升火，待压力升到0.5kg/cm2时，打开排气阀，使指针降落到“0”后，再关闭气阀，烧至所需压力。<br/>3.灭菌时间不易过长或过短，过长养分易被破坏，培养基颜色发黄，对菌丝生长不利；过短则达不到灭菌的效果。灭菌结束后，放气速度不能太快，宜逐渐进行，使指针慢慢下降到“0”，才揭开锅盖，否则棉塞容易冲出试管。<br/>在没有高压锅的条件下，可以用土蒸汽锅灭菌，但要相应延长灭菌时间，在100℃下的温度应保持4～6小时。为了灭菌彻底，可采用间歇灭菌法，每天水烧开后蒸煮1小时(100℃)，连续三天。<br/>培养基灭菌结束后，应立即取出试管直立放置2～3分钟，待试管壁上的水珠回到培养基内后，再趁热搁置斜面。这样，试管壁上不会有大量的水珠，温度适当。斜放时，一般使斜面为试管总长的二分之一至三分之一。放好后，再用纱布覆盖，防止冷却过程中因温度急剧变化而使管壁形成水珠。<br/>经灭菌后的斜面试管，必须在接种前于每一批或每锅中取出3～4支，放在28℃～30℃的恒温箱中培养2～3天作空白试验。经培养后，斜面仍光洁透明，无杂菌或细菌出现，则表示灭菌彻底，可作接种用。如发现杂菌，则应找出原因，并将这批试管重新灭菌一次后方可使用。<br/> 你失败的原因也包括你操作不规范或原始母种含有细菌,因为你培养的是细菌.琼脂的可能性不大. <p>兄台在哪个学校学的这个配方和这个操作方法？我是很佩服的了</p> <font size="7">顶顶顶!蘑菇女说的对,你照着做就准成功!但是---你做母种来做甚呢?为何不去当地农科院买几支了事呢?HOHO!</font> <p>你们说的到好，我们这边都没有什么农科院，就是有也没有这些</p><p> </p> 培养基灭菌不彻底造成.家用压力锅灭菌试管要50分钟.
[此贴子已经被作者于2008-3-12 22:32:52编辑过] {:soso_e183:}
页:
[1]