[讨论]晒晒我的‘二级菌种制作与培养’

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新写的二级菌种制作与培养，欢迎大家讨论

 

二级种制作过程

1、 培养料的选用：

（1）木  屑  木屑颗粒的粗细适宜于2mm之内，无尖刺物。栽培金针菇的木屑以软质的越陈旧越好。在使用过程中，堆底的木屑因含单宁量高，而且存在大量噬热菌，会造成灭菌不彻底，故不宜使用。新鲜木屑栽培金针菇，菌丝生长稀疏，产量低。不要用针叶树的木屑。

（2）豆杆

（3）麸  皮  选择新鲜、干燥、无霉烂的。

（4）轻  钙  选择干燥、无结块的。

2、称料  按照培养料配方准确将所需原料分别称取。

3、分装培养料  培养料拌好后，要迅速分装入特定的二级菌种瓶（袋）中，以免料堆放时间过长，造成酸败。

若使用瓶进行装料：

a、    装料前，必须把空瓶清洗干净，并倒出瓶内的水分。

b、    装瓶时，一手持瓶一手填料，装料时，先装到瓶高的2/3处，再用手握瓶口并轻轻敲打瓶底使瓶内培养料下沉压实。

c、     在培养料正中央竖直插入预埋棒，不能倾斜，插到底。

d、    再逐渐添加培养料，不断压实。

e、     通常，木屑松紧以能看到颗粒间稍有缝隙为度，料的高度以菌种瓶装到3/4为宜，罐头瓶则装到瓶肩部。这样有利于发菌，也便于观察。装好培养料后，要求瓶内培养料上下松紧一致，并压平表面。

f、      然后擦净瓶口和瓶外壁的培养料，塞好棉塞。棉塞要求松紧适度，提起棉塞，瓶刚好不滑下为宜，大小适宜，露出瓶口上端1cm，露出瓶口下端0.5cm，棉塞上下要光滑。

如果使用塑料袋进行装料：

a、    要求在拌料之前，对木屑等纤维材料进行过筛，除去锐利刺状物及粗大颗粒，以防扎破塑料袋。

b、    装料时袋底部两个折角不能进料。

c、 在培养料中央竖直插入预埋棒，菌包放在垫板上压料，菌包松紧度要适当，上紧下松，保持培养料不松动，以便摇菌上架。

d、    压好料后，将预埋棒向下旋，使预埋棒的“肩”略高于或平于料面。

e、 套套环时，要求套环下端距料面1-2cm，棉塞长度3-4cm长，露出袋口上端1cm，露出袋口下端0.5cm。

f、  棉塞松紧适度，捏住棉塞向上提时，菌袋随之提起，棉塞不掉。

4、装入周转筐  装入周转筐时不要把培养料弄散，一筐最多装12包。

注意：在整个过程中，要随时注意不要造成菌袋有微孔，发现破损菌袋及时更换。装料时松紧要适度，如果装料过松，则料袋容易变形，灭菌时料袋容易胀破，还易导致发菌稀疏；如果装料过紧，则容易造成通气不良、菌丝吃料慢。

蘑菇仓库

文采不错，可以出书了。

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接种操作

接种箱使用规程

1、接种箱必须放在清洁环境中使用。使用前，先用清水擦洗外壁，再用2%来苏尔溶液清洗内壁和接种用具。

2、按甲醛10mL/m³+高锰酸钾7g/m³对接种箱进行熏蒸处理。先将高锰酸钾倒入容器中，再加甲醛，迅速盖好箱盖，利用产生的甲醛气体密闭熏蒸12小时以上。

3、打开箱门通风30分钟，无明显刺激性气味时准备装箱。

4、接种完毕要及时清扫掉落在箱内的培养物和棉球等杂物，擦拭干净接种用具，并用清水擦拭箱内壁，再用甲醛10mL/m³+高锰酸钾7g/m³熏蒸接种箱，以备再用。

接种的无菌操作规程

1、接种前对接种箱进行彻底消毒，并准备好接种工具。

2、操作人员用肥皂或消毒液洗手后装入菌包、菌种、接种工具等必须物品，点燃菇保，立即关闭箱门进行消毒。

3、操作人员工作前换好工作服，并戴口罩，手套。

4、操作人员在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进箱内后，再用75%酒精棉球擦拭双手，接种工具及菌种，点燃酒精灯，进行接种。在接种过程中，不能向箱内传递物品，以免造成杂菌污染。

5、酒精灯火焰不可过小，否则会缩小无菌区范围。

6、二级菌种袋口需要用酒精灯火焰无菌区封闭，接种必须在无菌区内进行，注意避免烧伤菌种。

7、接种工具在使用前，应用火焰灼烧灭菌，接种工具需要进入菌袋的部分，不得与未灭菌的物体接触，棉塞塞入袋口的部分拔出后不得与未灭菌的物体接触。

8、接种要做到“轻、快、准”：“轻”指接种动作幅度不要太大，尽量减少空气流动；“快”指接种动作要快，避免菌种和培养料在空气中停留的时间过长；“准”指接种动作要准确到位，接种工具放置有序。

9、接种过程中，不得把手伸出接种箱。

 

二级种接种操作的具体过程

1、将接种物品搬进接种箱菌包摆在接种箱的左侧（左撇子放在右侧，下面的左右均互换），摆好接种用具，向箱内喷新吉尔灭。

2、将检查好的菌种用消毒液擦拭或喷洒后，放入接种箱内。

3、用菇保熏箱25分钟后，接种。

4、接种前，操作人员戴好口罩、手套，在接种箱外用75%酒精棉擦拭双手，双手伸进接种箱后，再次用75%酒精棉擦拭双手，特别是手指及指尖。

5、接种耙用75%酒精棉擦拭。点燃酒精灯，接种耙在火焰上灼烧灭菌，灼烧长度为略大于一个试管长。

6、右手握住接种耙柄的顶端，取一支试管种用75%酒精棉消毒试管外壁。拔掉棉塞，用火焰灼烧试管口，灼烧时应不断转动管口，将试管口上沾染的少量杂菌烧死。

7、将接种耙伸入到菌种试管内，先接触一下没有长菌种的培养基或内壁，待接种耙冷却后，刮去爬壁的气生菌丝，根据不同菌种选择是否刮去培养基表面的气生菌丝（金针菇的气生菌丝需要刮掉，白灵菇、猴头菇的气生菌丝不能刮掉）。

8、用接种耙将菌种培养基横向切成1cm宽的菌种块，培养基离试管口近的部分由于薄可切的更宽些，一支20mmX200mm规格的试管种可切成8块。然后将接种耙放在试管内，试管放在试管架上，试管口要在酒精灯的无菌区内。

9、有少许75%酒精棉擦拭接种小钩，再在火焰上灼烧灭菌。将小钩戴在右手中指上，小钩位于手背侧。小钩不能碰触任何未灭菌的地方，如果碰到则应在火焰上反复灼烧灭菌。

10、左手取菌包，将其紧挨酒精灯放置，左手把住套环，右手拔下棉塞，握在手里，用在火焰上灼烧后的小钩钩出预埋棒（每次拔棉塞前都要灼烧一次），左手拿起试管种用接种耙将刚切好的小菌块再纵向切一刀，分成两块（培养基离试管口近的部分仍横向切），每个菌包接入二次切好的菌块3块。

11、迅速将棉塞过火后塞好。

12、将接好菌种的菌包放在接种箱的右侧。摆时仍注意不能将料挤散。

接种操作注意事项

接种操作的程序中任何环节都很重要，稍有不慎，就会导致失败。以下几个方面要特别注意：

1、菌包温度降至30^oC以下方可接种，接种箱温度不应超过30^oC，高温季节可在一日内气温较低时操作，或采取降温措施。

2、装箱时从筐中取菌包要拿包身，不可提袋口套环装箱，出箱、上架时亦是不可提套环。装、出箱时菌包不能随意磕碰，以免碰散培养料或碰坏菌袋。在箱内摆包时也不要过分挤压，以免使培养料过松无法摇菌上架。

3、 酒精灯火焰要高   影响酒精灯火焰大小的因素主要是酒精的浓度和灯芯。酒精浓度越高，燃烧越好，所以，要使用95%高浓度的工业酒精。如果灯芯材料太实，塞得又紧，内吸的酒精太少，火就不旺。灯芯最好用棉花捻制，并拔出适当长度。

4、 接种物和被接种的容器口要消毒灭菌   接种操作前要将试管口用75%酒精棉球擦拭。被接种的袋口一定不可远离酒精灯火焰。

5、 一切暴露菌种和基质的操作必须在火焰上方进行   菌种和被接种的袋子必须在火焰上方打开，打开后就不能离开火焰，一直到接种操作完成封闭好。因为只有火焰周围很小的范围内的空间才是绝对无菌的。

6、 接种工具一定要灼烧彻底   接种用的接种耙、接种钩、接种勺等要在火焰上灼烧彻底，并注意工具的长度。接种工具灼烧长度以伸进试管的长度为度，重点是取种接种的部位，以上部分在火焰上方反复灼烧3~5次即可。

7、 接种工具灼烧后要冷却   火焰灼烧灭菌后若直接切取菌种，温度太高会烫死菌种。

8、 接种工具的无菌状态   接种工具经火焰灼烧后其接触菌种的部位已达到绝对无菌状态。在其接触菌种前绝对不可碰触任何非无菌状态的物品。一旦碰触一定要重新灭菌。

9、 棉塞的无菌状态   大包棉塞操作中要保持无菌状态。在操作中将棉塞露在袋子外面的部分用手指夹起，塞入袋内的部分不可碰触，更不可拔下后置于台上。一旦不慎落地，要在火焰上反复灼烧后方可使用。

10、 接种完毕后，要及时清理接种箱，排出接种时酒精燃烧放出的废气。

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二级种培养过程

一、培养的重点工作

1、培养室的处理  培养室使用前应清理干净地面及培养架上的灰尘、杂物，用10%-20%漂白粉拖地后，点燃气雾消毒盒对培养室进行气雾消毒。

2、菌包（瓶）的摆放 摆放菌种时，瓶与瓶或袋与袋之间均应留有一定的空隙，有利于热量散发。如果瓶、袋紧靠，菌丝的呼吸热不能得到有效的散发，势必导致高温烧菌现象发生。

3、温度控制  二级种一般置于18-20^oC下培养。温度略低于菌丝最适生长温度，可使菌丝生长健壮，一般在24-28天长满菌袋。

4、湿度控制  培养室内的空气相对湿度应保持在50%-60%不宜过湿。

5、通风控制  培养期间要每天清晨通风换气1h，保持室内空气新鲜，以补充室内O₂的消耗，并排除室内CO₂，以利于菌丝生长。

6、光线控制  菌种培养阶段应保持暗光条件，减少培养室的光照强度。

7、检查杂菌  二级种第五天查第一次污染，每四天查一次，培养过程中共查四次污染。在使用之前再检查一次。

8、菌龄的控制  菌种培养期间，要控制好菌龄，培养好的菌种要及时使用，防止菌种老化。一般在菌种长满袋2天后使用。菌龄过长，不但菌丝活力下降，还会造成培养料营养的消耗并增加菌种后期污染。

二、出现的异常现象

1、杂菌污染  在正常情况下，二级种污染率在5%以下。造成污染主要有以下几种原因：

a、灭菌不彻底  培养料会有酒酸味。

b、接种操作不规范  必须要严格遵守无菌操作规程，接种人员要保证接种中无菌操作质量。

c、菌种带杂菌  要经常检查一级种，应尽量采用生活力强、菌龄适宜、抗逆性强的优良菌株，如发现杂菌必须及时清理，防止进一步污染。

d、培养室不洁净  有时在菌种已经长满料面后，还会在料面长出杂菌，通常是由于培养室不洁净造成的。

2、断菌  “断菌”是菌丝在培养料内生长过程中产生菌丝断裂、断层的现象。原因可以从以下两点分析：

a、菌种的培养料装的过松，萌发出来的菌丝细弱无力，容易发生“断菌”现象；

b、培养料腐熟过度，含水量过高，温度过高，发生菌丝断裂现象。

3、“不吃料” “不吃料”原因如下：

a、接种操作不当  在接种时，接种工具在火焰灼烧后应在管壁或瓶壁上冷却后，再去铲菌种，铲出的菌块不要靠火焰太近，要迅速通过火焰的无菌区送入菌瓶（袋）内，以免菌丝烧伤。培养料高温灭菌后，要充分冷却。此外，接种箱内消毒用药必须按规定量使用，防止过量。

b、菌种老化  如果接入的一级菌种或二级菌种的菌丝体，在不良环境下长期贮藏或培养时间过长，造成菌种衰老，引起生活力降低，也会导致菌丝失去生长能力，并引起“不吃料”现象。

c、培养料不适合

香菇人

没有什么不妥。对我来说。太教条了。没有一点新鲜感。对初学者来说是很有用的流程。 楼主是科班出来的。理应如此。

happybird

这些写出来是为了让人一看就明白，然后还能实施的，如果大家觉得有什么不妥当的地方，请多提宝贵意见。谢谢

b000568391

我是新手   学习了啊   谢谢

发酵罐

谢谢楼主，写这文章会花费很多精力，鼓励一下，对刚入门的朋友有帮助。

happybird

QUOTE:

以下是引用香菇人在2011-2-11 18:00:26的发言：
没有什么不妥。对我来说。太教条了。没有一点新鲜感。对初学者来说是很有用的流程。 楼主是科班出来的。理应如此。

我想到的都写在这里了，有很多没写到位，希望大家能帮忙添添
这些就是写给新手的，写的越细上手越快啊

chen53201

确实和教科书上很似啊。不过还是要谢谢楼主的辛苦也。