[原创]多脂磷伞多糖的药效学研究

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【易菇论坛首发】 

　摘　要　以荷S₁₈₀瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型，研究了多脂磷伞多糖的体内抗肿瘤作用。结果表明多脂磷伞多糖不仅能抑制体内肿瘤生长，还能提高机体的免疫能力。另外，多脂磷伞多糖对金葡菌与大肠杆菌有较好的抑菌作用，还具有明显的强壮作用（抗疲劳作用）

　1　材料

1.1　药物：多脂磷伞多糖为多脂磷伞中提取的多糖物质。环磷酰胺：上海华联制药有限公司产品，批号20010304。
　　1.2　S₁₈₀及艾氏腹水瘤株：中国医学科学院肿瘤医院定期传代瘤株。

1.3　细菌：菌种为金葡菌、大肠杆菌、志贺痢疾杆菌、白色念株菌、杂曲霉菌，皆由白求恩医大微生物教研室提供。
　　1.4　动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重(22±2) g，购自中国人民解放军农牧大学实验动物中心。

2　方法

2.1           小鼠荷瘤：

取接种6 d的S₁₈₀及艾氏腹水型小鼠腹水，用灭菌生理盐水(1：3)稀释，经右上肢靠右肩甲骨处皮下注射（sc）或腹腔注射（ip） 0.2 mL (4×10⁶～6×10⁶个瘤细胞，活细胞率＞95%)，制成实体瘤型或腹水型荷瘤小鼠模型。

2.2           药物剂量与给药途径：

按实验设计剂量ip(实体瘤型)或肌肉注射im(腹水瘤型)给药，阴性对照组用生理盐水ip或肌肉注射（im），阳性对照组用环磷酰胺ip或im，每只小鼠每天用药1次。
　　2.3　抑瘤率、脾指数和胸腺指数的计算：

荷S₁₈₀实体瘤型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，8 d后称重、处死，分别取瘤、脾和胸腺，体重，计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数并进行统计学处理。
　　2.4　存活率的计算：

艾氏腹水型小鼠于接种后24 h随机分组，连续给药8 d，停药后继续观察，直到自然死亡，计算其存活延长率。

3　结果

3.1　对荷S₁₈₀瘤小鼠的抑瘤作用：见表1。

表1　对荷S₁₈₀小鼠肿瘤的抑制作用( ±s)

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组别	剂量 (ｍｇ/kg．d)	动物数 (只)	体重变化(g)		瘤重	抑瘤率
			疗前	疗后
对照	-	15	19.4±1.8	28.9±0.7	2.47±1.02	0
多脂磷伞多糖	1000	12	19.5±0.9	27.1±0.5	0.91±0.49	63.2**
	500	12	19.1±0.6	28.2±0.4	1.33±1.26	46.2**
	250	12	18.9±1.3	29.4±0.8	1.91±0.47	22.6*
环磷酰胺	0.01	12	19.3±0.7	29.6±1.3	1.03±0.57	58.3**

与对照组相比：^*P＜0.05　^**P＜0.

 3.2　对艾氏腹水型小鼠存活期的影响:见表2。

表2　对艾氏腹水型小鼠存活期的影响( ±s)

组　别	剂量 (ｍｇ/kg．d)	动物数 (只)	存活 (d)	延长率 (%)
对照	－	14	12.57±1.21	0
多脂磷伞多糖	1000	10	18.60±0.76	48.0**△
	500	10	17.40±1.32	38.4**
	250	10	14.70±0.54	16.9*
环磷酰胺	0.01	10	16.30±0.87	29.7**

　　与对照组相比：^*P＜0.05　^**P＜0.01
　　与环磷酰胺组相比：^△P＜0.05

3.3           对荷S₁₈₀瘤小鼠免疫指标的影响：见表3。

表3　对荷S₁₈₀瘤小鼠免疫指标的影响( ±s)

组　别	剂　量 (ｍｇ/kg．d)	动物数 (只)	脾指数	比率＃ (%)	胸腺指数	比率＃＃ (%)
正常组	－	12	6.76±0.58		2.32±0.43
对照	－	18	13.39±0.45	198.1	1.31±0.57	56.5
多脂磷伞多糖	1000	12	8.63±0.62*	127.8	1.70±0.95	73.3
	500	12	9.86±0.52	145.9	1.92±0.24△*	78.6
	250	12	10.23±1.36	151.3	1.55±0.37	66.8
环磷酰胺	0.01	12	9.32±0.87	137.9	1.61±0.69	69.4

^＃空白对照组、各用药组与正常组脾指数比率；　^##空白对照组、各用药组与正常组胸腺指数比率。
　　与对照组相比：^*P＜0.01；与环磷酰胺组相比：^△P＜0.01

表1～3结果表明，多脂磷伞多糖PWAE 100ｍｇ/kg^．d有明显抑瘤作用(63.2 %)，且能明显延长艾氏腹水型小鼠的存活期(48.0 %)，

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随着剂量减小，抑瘤率和存活期也减小。多脂磷伞多糖PWAE 100ｍｇ/kg^．d与阳性对照组环磷酰胺组相比，抑瘤率与后者(58.3 %)相近(P＞0.05)，存活期延长率比后者(29.7 %)高(P＜0.05＝。小鼠荷瘤后，引起免疫指标不正常，表现为脾指数升高，为正常鼠的198.1 %，胸腺指数下降，为正常鼠的56.5 %，多脂磷伞多糖PWAE 不同剂量组均能使荷瘤小鼠脾指数降低，胸腺指数升高，向正常值靠拢。多脂磷伞多糖PWAE 100ｍｇ/kg^．d剂量组降低脾指数最显著(127.8 %)，与对照组相比有显著差异(P＜0.01，与环磷酰胺组相比无显著差异(P＞0.05)。500ｍｇ/kg^．d剂量组上升胸腺指数最显著，与对照组相比有显著差异(P＜0.01，与环磷酰胺组(69.4 %)相比有显著差异(P＜0.01，说明其效果比后者强。综上所述，多脂磷伞多糖不仅能抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，延长小鼠生命，而且有改善荷瘤小鼠免疫机能的作用。

3.3           体外抑菌实验：

取上述实验菌种5种，每种2株，共12株。采用试管二倍递减稀释法，将系列稀释的受试药液与菌液混合，置37℃温箱培养18～24 h，观察试管内细菌生长状况，管内清亮者为细菌生长受抑。白色念株细菌与杂曲霉菌接种在含药液的沙保氏固体培养基上，白色念珠菌置37℃温箱培养24～48 h观察生长情况，杂曲霉菌置22℃温箱培养48～72 h观察生长情况。另设空白管作细菌生长对照。实验结果见表4。

表4　多脂磷伞多糖的抑菌作用　　　　　mg/ml

菌　　株　　　株数	MIC
金黄色葡萄球菌　　2	9.75
大肠杆菌　　　　　2	4.875
志贺痢疾杆菌　　　2	＞78
白色念珠菌　　　　2	＞78
杂曲霉菌　　　　　2	＞78

　　实验显示，多脂磷伞多糖对2株G^＋金黄色葡萄球菌MIC(最低抑菌浓度)为9.75 mg/ml，对大肠杆菌MIC为4.875 mg/ml，表明湖北海棠叶水煎液对金葡菌与大肠杆菌有较好的抑菌作用。这一结果揭示多脂磷伞多糖大肠杆菌及金葡菌具有较好的抑制其生长的药理作用。

3.4               强壮作用（抗疲劳作用）

  按表5分组给药，于7天内，每天灌胃一次，对照组灌胃等体积蒸馏水，末次给药2h后，将小鼠投入温度为23～25℃的水中，记录小鼠游泳时间，结果见表5。多脂磷伞多糖可明显延长小鼠游泳时间，表明多脂磷伞多糖具有明显的强壮作用（抗疲劳作用）

    表5  多脂磷伞多糖的强壮作用（抗疲劳作用）（x±s,n=10）

 组 别    　　　　　　  剂 量(ｍg/kg)     游泳时间(min)  

对照        　　　 －  　         　　　192±31.04        

多脂磷伞多糖       1000             274±54.12***

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500                                                 　　252±69.82***

250　　　　　　　201±60.12**

              与对照比较，^＊P<0.05,^**＊P<0.001

4　讨论

以荷S₁₈₀瘤小鼠及艾氏腹水型小鼠为模型，研究了多脂磷伞多糖的体内抗肿瘤作用。多脂磷伞多糖有明显的抗体内移植瘤和延长荷瘤小鼠存活期作用，并且多脂磷伞多糖还能降低荷瘤小鼠脾指数，升高胸腺指数，使之趋向正常值。提示多脂磷伞多糖不仅能抑制体内肿瘤生长，还能提高机体的免疫能力。体内实验结果说明多脂磷伞多糖能通过提高机体免疫力来达到抗肿瘤作用。另外，多脂磷伞多糖还对金葡菌与大肠杆菌有较好的抑菌作用，并具有明显的强壮作用（抗疲劳作用）。

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