[分享]显微镜的使用与细菌形态的观察

myb

 

（一）显微镜的结构

明视野显微镜由机械部分和光学部分组成。 

1．机械部分

（1）镜筒  位于显微镜上方。上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种，多为斜筒式。

（2）镜臂  为弓形金属柱，支持镜筒。

（3）镜头回转器  装于镜筒下端，用于安装物镜和转换物镜。

（4）载物台  物镜下的平台，用以载放被检标本。中央有通光孔，供入射光通过。载物台上，以片夹固定标本，或以标本推动器将标本固定后，前后左右推动，找寻不同观察视野。

（5）调节器  为调节焦距的装置，有粗调节器和细调节器两种。利用它们使镜筒或载物台上下移动，调节物镜与标本间距离，使物像更清晰。有的显微镜还有专司聚光器升降的调节器。

（6）镜座  位于显微镜底部，支持全镜。

2．光学部分

（1）目镜  可将物镜所成实像进一步放大，但不增加分辨力。目镜上标有5×、10×、15×等，各代表其放大倍数。

（2）物镜  是显微镜中决定成像质量和分辨能力的重要部件，其作用是将标本放大。物镜上常标有放大倍数、数值口径等参数。物镜根据使用条件不同，一般可分为干燥物镜（包括低、高倍镜）和浸油物镜（100×）。

（3）聚光器  位于载物台下方。其作用为将入射光聚集于标本之上。聚光器位置升降可影响视野的明亮度。

（4）光圈  安装于聚光器下方。由十几张金属薄片组成，可通过放大和缩小调整透进光强弱，调节对比度。

（5）光源  分为两种。一种为反光镜，可采集外来光线并送入聚光器。有平、凹两面之分。通常用平面镜，在照明条件较弱或用油镜时，采用凹面镜。另一种为安装在镜座内的内置光源，亮度可调。

二、油镜的使用与保护

1．油镜的原理

微生物标本的检查，常用显微镜进行。其中细菌体积微小，以μm计，必须用油镜才能分辨清楚。

显微镜的分辨力，即其分辨两点之间最小距离（R）的能力，由作用光波长（λ）和物镜的数值口径（N.A.）决定。 

明视野显微镜以可见光为光源，波长平均值固定在550nm左右。所以只能通过增加物镜的数值孔径（N.A.）来提高显微镜分辨力。N.A.表示由聚光镜而来的锥形光柱照射在观察标本上被物镜聚集的量。

N.A.=n·sin（θ/2）

其中θ为镜口角（图1-2），指通过标本的光线投射到物镜的角度。其理论限度在180°，一般最大角度为120°，所以 sin（θ/2） 总小于1。n指物镜与标本间介质的折射率。干燥物镜所用介质为空气（n≈1），入射光通过标本玻璃（n=1.55）后，在空气中发生折射，部分光线散失。故N.A.不超过1。而油镜以香柏油为介质（n=1.56，与玻璃相近），镜头工作时浸入油内，可消除光线通过玻璃与物镜间空气时发生的折射现象，避免光线损失，故油镜数值口径得到较大提高（可达1.25），显微镜的最小分辨距离也达到约0.2μm，几乎可看清所有细菌。

2．油镜的使用步骤

（1）观察前准备

一手握镜臂，一手托住镜座，取出显微镜置于平稳实验台上。镜座距实验台边沿约3-4cm。镜检者姿势端正，两眼睁开，以减少疲劳。一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录。手不可直接触摸镜头，可用擦镜纸擦去镜头灰尘。

（2）采光  

将低倍镜转到光路中，适当调节光圈和聚光器，转动反光镜或打开内置光源，使视野得到均匀照明。注意：当用油镜观察标本时，光线宜强，可完全打开光圈，上升聚光器与载物台相平，以凹面反光镜采光。

（3）观察

通过低倍镜调节入射光线，使视野最明亮。从二重瓶内瓶中取香柏油1-2滴滴于标本片上要观察的部位。标本固定于载物台上，转换为油镜。双目侧视下，转动粗调使油镜头浸入油中几乎与标本相接触。然后左眼从目镜观察，徐徐下调载物台，直到看见模糊物像，再用细调节器调至物像清晰，观察标本，绘图。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。注意：非在侧目注视下，不可使油镜与标本接近，以免压碎玻片，损坏镜头。

3．显微镜用毕后的处理

（1） 以粗调节器调开油镜，移去标本片。

（2） 用擦镜纸擦去油镜上的香柏油。如油过粘、过干，可以擦镜纸沾少许二重瓶外层的二甲苯擦镜，然后立即用干擦镜纸擦去残留二甲苯，以免镜头脱胶。

（3） 加少许二甲苯于滴过油的标本上，以毛边纸向一个方向轻轻拖拉，除去标本上的油。一次不行可重复，但不可来回擦抹，以免擦掉标本。

（4） 将显微镜各部分还原：聚光器下降，反光镜垂直于镜座，物镜镜头离开通光孔上方转成八字形。放入镜箱。

wshzgz

此显微镜应该是很古老的型号了

田鸿

微生物学实验指导。

danielzfranks

但是华而不实

danielzfranks

绝大多数人使用不到的

danielzfranks

微生物学实验指导