胶陀螺液体菌种标准及生产技术规程

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胶陀螺液体菌种标准及生产技术规程

作者：毛玉帮 |  来源：吉林省食药用菌信息网  |

1.液体摇瓶菌种标准及生产技术规程。 （1）菌种Bi－B7　斜面菌种作为待接菌种 （2）摇瓶菌种标准： ①外观形态：菌液澄清、棕黄色液体、菌丝呈放射状， “菌球”味感有水果香味、稍酸、菌球量占30%以上。 ②镜检形态：美蓝单染色后观察，菌丝着色深、均匀、粗壮、分枝呈树枝状。侧丝线形、顶端稍弯曲、生长点多见，可见大量椭圆形分生孢子，无杂菌污染，无明显空泡，无锁状联合。 （3）液体摇瓶生产技术规程： ①工艺流程：母种       一级摇瓶种子        二级摇瓶发酵。 ②培养基配方：蛋白胨1.5%、酵母膏0.1%、麦芽糖1%、葡萄糖2%、柞木屑5%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钾0.15%、维生素B10. 01%、pH值6.5（消前）。 ③制法：按配方规定量准确称取各药品，加一定量水加热溶解，定容至规定量，柞木屑加水浸煮，温火下30～40min，用八层纱布过滤取滤汁，充分拌匀后分装于三角瓶中（500ml三角瓶装量至200ml）塞上棉塞（棉塞包扎纱布）上覆牛皮纸，置高压蒸汽灭菌锅灭菌（1kg/㎝2）30min，取出检验无杂菌污染备用。 ④接种：在无菌条件下，按斜面与摇瓶之比为1：5（斜面比摇瓶）的比例接种。一般一只斜面母种可接500 ml三角瓶2～3瓶。取一支带长把的铁环，环上缠绕纱布后，吸足95%酒精，点燃后套在大三角瓶瓶口上，形成一道“火圈”，阻止杂菌侵入，将斜面母种挖块后，经“火圈”中心接入瓶内，每瓶不少于3块（0.6×0.5㎝/块）。 ⑤培养：要求培养温度22℃±2℃，旋转式摇床的转速为170～200转/min，光线以黑暗为佳。 ⑥培养终止时间为7～10d。 2.液体种子罐培养菌种及生产技术规程 （1）菌种：使用BI—B7经摇瓶培养的液体菌种，选用新培养的摇瓶菌种，菌龄不超过7d，菌球不能中空，不能有太多空泡。 （2）种子罐培养菌种标准： ①外观形态：基本同摇瓶种子，只是菌球量要占50%以上，pH值为6.5，若菌丝已经中空，表明菌球中部菌丝已老化，部分菌丝自溶。菌丝在培养中呈絮状，菌球表面有刺，说明菌种旺盛； ②镜检：同摇瓶菌种。 （3）液体种子罐生产技术规程： ①培养基配方：葡萄糖2%、麦芽糖1%、玉米浆0.5%、柞木屑（柞树皮）5%、酵母膏0.2%、硫酸镁0.05%、磷酸二氢钾0.1%、消沫油0.1%、pH值6.5（消前）； ②制法：按规定量准确称取各药品（柞木屑或柞树皮）加水浸煮，温火下30～40min，用八层纱布过滤取滤汁，加入适量水加热溶解，搅匀，投料量（加水后）约占罐容积的70%（经视窗口加液），扭紧封严视窗，加温至121℃，实罐蒸汽灭菌40min，菌检，无杂菌污染，保压冷却至26℃接种； ③接种与培养：接种量为10%，将视窗盖取下，在视窗基部套上火焰圈，点燃火焰圈，迅速经视窗口将三角瓶液体种子倒入种子罐中，及时扭紧封严视窗，熄灭火焰圈，通无菌过滤空气，空气流量每分钟1：1～1：1.5（V/V），罐内温度为22℃±2℃，罐压0.5kg/㎝2，培养3～4d； ④放罐指标：有水果香味，pH值降至3.6～4.0，还原糖降至0.9%以下，残糖0.5～0.4%，菌丝体稠密，培养液粘度增大，菌丝量不再增加或稍有下降，镜检无空泡或空泡较少，就应及时放罐，约培养7d左右无杂菌污染，可留作菌种用。

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