菌种制作
固体菌种(母种、三角瓶原原种、原种、栽培种)生产工艺及操作规程
(一)斜面菌种:试管种(母种)
1、培养基:
(1)配方:标准PDA粉
(2)制作方法:称取200g(去皮土豆),加水1000ml,加热烧开后20分钟,及可八层纱布过虑调制到1000ml温度维持在100℃加入20g(干重)预先50℃温水浸泡20分钟的琼脂条,琼脂完全融化后四层纱布过滤,维持80℃加20g 葡萄糖完全融化后分装至试管中,装入量为试管刻度的1/5,塞好棉塞,7支试管一捆用牛皮纸包扎好。
(3)灭菌:采用高压蒸汽灭菌法,压力0.05Mpa放辆次冷气,压力0.1-0.15Mpa维持30分钟。
2、接种:按照灭菌操作规程,挑取0.5*0.5cm大小的菌种块于试管斜面中央。
3、培养:(暗培养)
(1)培养房间:1号菌种室。
(2)培养温度:23~25℃
4、培养时间:15天
(二)基质菌种:三角瓶(原原种)
1、培养料:
(1)原材料及配方:木屑1.71Kg,米糠0.26Kg,麸皮0.14Kg玉米粉0.06Kg水0.5Kg,制20瓶三角瓶。
(2)制作方法:将以上原材料拌和后加水拌匀装到150 ml的三角瓶内,每瓶装料90g,高度在120ml的刻度线上即保证装料松紧度的一致,然后揿平,打洞至底,清洗,塞好棉花用纸包扎好。
(3)灭菌:采用高压蒸汽灭菌法,压力0.05Mpa放辆次冷气,压力0.1-0.15Mpa,时间90分钟。
2、接种:按照无菌操作规程,将发满菌的斜面试管菌种,取它的最终佳菌段,去掉部分的培养基,均等地分为五份,将其中的一份挑至瓶的洞内至底,再一份盖洞口,将其余三份均匀地覆盖在三角瓶的面上。
3、培养:(暗培养)
(1)培养地方:1号菌种室。
(2)培养温度:23~25℃
4、培养时间:25天
(三)原种
1、培养料:
(1)原材料及配方:木屑60%,米糠23%,麸皮12%玉米粉5%水62%,制128瓶。
(2)制作方法:将以上原材料拌和后加水拌匀装到1100cc瓶内,每瓶装料700g,料面跟瓶口距离1.5cm即保证装料松紧度的一致,打洞至底,清洗,加瓶盖。
(3)灭菌:采用高压蒸汽灭菌法,,压力0.1-0.15Mpa。采用高压杀菌法。杀菌时间与温度如下:
灭菌前 抽空2次
100℃ 40分钟
115℃ 20分钟
121℃ 45分钟
灭菌后 抽空3次
2、接种:按照无菌操作规程,将发满菌的三角瓶菌种,取它的最终佳菌段,在酒精灯火焰上处理三角瓶表面的气生菌和接种快,三角瓶接到瓶子是菌种必须落到瓶底,菌种铺盖瓶口。
3、培养:(暗培养)
(1)培养地方:2号(3号)菌种室。
(2)培养温度:23~25℃
4、培养时间:40天
5.菌种管理
每批原种每隔5天检查发菌状况并做记录。
(四)栽培种
1、培养料:
(1)原材料及配方:木屑60%,米糠23%,麸皮12%玉米粉5%水62%,制128瓶。
(2)制作方法:将以上原材料拌和后加水拌匀装到1100cc瓶内,每瓶装料780g±10g(含瓶和瓶盖),料面跟瓶口距离1.5cm即保证装料松紧度的一致,打洞至底,加瓶盖。(用自动装瓶机装)
(3)灭菌:采用高压蒸汽灭菌法,,压力0.1-0.15Mpa。采用高压杀菌法。杀菌时间与温度如下:
灭菌前 抽空2次
100℃ 40分钟
115℃ 20分钟
121℃ 45分钟
灭菌后 抽空3次
(4)搅拌:加水前15分钟
加水后20分钟
2、接种:自动接种机接
3、培养:(暗培养)
(1)培养地方:2号(3号)菌种室。
(2)培养温度:23~25℃
4、培养时间:40天
5.菌种管理
每批原种每隔10天检查发菌状况并做记录。
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