大神救命，液体菌种老坏，做不出来

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我从网上买了一个30L不锈发酵罐，做了一个多月了，摇瓶都做出来了，接入发酵罐老是失败。

我的培养基配比是：

土豆：3000g

麦麸：900kg

红糖：450g

葡萄糖：300g

磷酸二氢钾：45g

蛋白胨：45g

硫酸镁：22.5g

泡敌（千一牌，粉剂）：40g

土豆和麦麸煮后过滤，加入糖磷钾等辅料，高压121度灭菌2小时，通入无菌空气（三个过滤器都经过蒸气在位灭菌，测另一端蒸汽为95度，灭菌20分钟），风扇辅助降温。

等培养液降至30度以下，在火圈保护下接种，接种为500ml三角瓶，内盛200ml摇瓶菌种（试管种自己培养的，培养基验证过）。

24小时观察菌种有异味，菌种失败。

罐边上的白点是在生长的菌丝，液体已经发酸发臭了。白天气温33.8度，夜间22度。

ynymnjx

空气过滤器灭菌不彻底，灭菌后要吹干才能把无菌空气压入罐内，我个人观点

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ynymnjx 发表于 2014-5-30 12:47
空气过滤器灭菌不彻底，灭菌后要吹干才能把无菌空气压入罐内，我个人观点 ...

非常感谢，我先试试。

西北狼525

1确定摇瓶没问题，2确定瓶接罐时是否无菌操作。3过滤器最好单独高压灭菌。4最下面一张图水好像加多了。

西北狼525

你这个罐多少钱？我也正在研究液体菌种。

bond366

没有这金刚钻，不揽这瓷器活。 要么就从头到尾各关节都研究解决到位。

小小小8

我一打眼就看到一点   30L的罐你只用了200ml的种子？  我一般按5%-10%的量加，不然种子萌发慢 不能形成优势群体 很容易被污染的

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西北狼525 发表于 2014-5-30 15:25
1确定摇瓶没问题，2确定瓶接罐时是否无菌操作。3过滤器最好单独高压灭菌。4最下面一张图水好像加多了。 ...

内容非常感谢，改进后再试。

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小小小8 发表于 2014-5-30 18:21
我一打眼就看到一点   30L的罐你只用了200ml的种子？  我一般按5%-10%的量加，不然种子萌发慢 不能形成优势 ...

多谢指教，加大接种量，再做。

zhengzhaohui

论坛里有关于液体菌种详细论述的帖子，你可以找找看看。