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2017第五届全国天麻会议暨中国(小草坝)天麻产业发展高峰论坛
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天麻“仨菌一种成麻”新学说能给力其第二营养源培育麻王

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发表于 2013-12-11 17:08:51 |显示全部楼层
开发天麻猪苓窝生防菌(麻窝国防菌、苓窝生防菌)激活土壤有益微生物,给力天麻猪苓第二营养源实现仿野栽培好收成!

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论坛元老

发表于 2013-12-12 16:41:03 |显示全部楼层
什么意思?原来是两菌,现在创新了吗?
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发表于 2013-12-19 15:46:39 |显示全部楼层
佳明 发表于 2013-12-12 16:41
什么意思?原来是两菌,现在创新了吗?

天麻“俩菌一种”是徐锦堂50年研究成果已推广成熟的核心技术(着力于开发天麻第一营养源),天麻“仨菌一种成麻”是我提出的新学说(着力于激活土壤第二营养源),但这“俩菌一种”下地后要面对土壤微生物大环境中好多微生物的博弈——优胜劣汰啊,我们知道天麻萌发菌能拮抗部分枯草杆菌等,蜜环菌也能部分拮抗杂菌,但那些没有良心活技术设备不好的制菌种者所生产的出的“半瓶菌”在这环境中就多死定了。农业学大寨推广的5406放线菌抗生菌肥属于放线菌类群,我估计可用作麻窝生防菌来拮抗杂菌(细菌+霉菌)吧?麻窝生防菌就是在栽培天麻的土壤窝里人工补充些放线菌型的抗生菌,就能确保其第二营养源的给力了?但目前我这个设想还没有条件做实验——平皿仨菌对抗实验和麻窝仨菌成麻实验,建议大家开展实验找出麻窝生防菌给力天麻再生产:萌发菌好像胎盘菌育婴儿(先天生长)、蜜环菌吃木头供养好像奶母菌培育小儿童(后天生长)成箭麻,但土壤营养若能成为其第二营养源就会再长大点啊(比素砂栽培好),开发麻窝国防菌就可调整微生物区系促成有益微生物多生长并激活土壤这个第二营养源了,可行吗?大家看
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发表于 2013-12-19 15:49:18 |显示全部楼层
范学钧写给北京天麻会各位同仁的一封公开信
天麻四星老师团队等各位老师和麻友们好!咋们麻友都要向“天麻俩菌一种”开创者南周北徐暨石斛小菇郭顺星、杂交麻王绍伯4位老师团队学习其知识创新的探索精神!
我叫范学钧,是中国农业最早的农业推广员——周先祖故里暨医祖歧伯桑枝庆阳基层农业推广者之一,因参加陈克恭书记2000.8.13创建的庆阳县黄花菜研究所工作并出版《黄花菜产业开发》等,有幸于2009.5.1被北大生物本科、科技哲学硕士刘国琪找来庆阳看黄花菜,现已成功远程指导其海南岛做反季节黄花菜生产鲜上市直销北京获成功——另类“刘国琪黄花菜创业模式”已走红媒体。我做农业推广近27年了,多沉迷于蘑菇天麻菌物秘密的自修学习希望有平台去探索发现,2012年宜昌天麻会后非常荣幸的和大家一起走到天麻产业开发队伍中来携手共进——特别是易菇网“全国天麻会议QQ群”冠名我的QQ号为“我中国天麻群论”之剑、“中国神奇小草坝天麻QQ群”冠名我QQ号为“小草坝天麻群论”之剑,使我由此必须走上“天麻俩菌一种”技术推广路,这样我就更应与时俱进加强学习和实验——我愿铸剑为犁成十字架,为中国黄花菜圈暨中国天麻圈的技术推广事业做好萤火虫路标奉献余生余智。为此我向大会提交了学习心得“天麻科普推广俩歌”敬请大师赐教麻友斧正,并妄想在大师麻友们开创的“天麻俩菌一种”产业大道上,再铺轨“菌麻一窝亲+麻窝生防菌”(对猪苓来说就成:菌苓一窝亲+苓窝生防菌)来更好的为民创薪,建议大会倡导麻友学习毛主席农业学大寨运动科普推广5406菌剂+农用抗菌素920的群众路线民主集中制办法,广泛发动麻友们“初选”出麻窝生防菌,再由药植所等天麻研究所大师们集中民智“决选”出最优秀的麻窝生防菌产业化推广,为将中国天麻推向产业化国际化之路做好“仨菌一种成麻”孵化好技术支撑。
谢谢!范学钧拜上 2013年10月草于甘肃庆阳
范学钧建议北京天麻会大会组委会再邀请三方面专家来会传经送宝以做大中国天麻产业化国际化蛋糕:
一是特邀中国微生物研究所放线菌及农用抗菌素研究专家阮继生、刘志恒等前辈来讲讲那些放线菌暨抗菌素能在天麻猪苓栽培上推广普及,以想法激活天麻填充料土壤微生物活性来最大限度发挥天麻、猪苓的第2营养源的保障供给;
二是特邀天麻制药企业暨药科大学专家来讲天麻制药产业拉动中国天麻产业化、如邀请远端取穴治病的庞承泽等中医养生专家来讲天麻保健药酒等天麻民用化养生科技开发;
三是特邀蜜环菌博士硕士如秦国夫、孙立夫、赵俊、季宁等老师来讲讲中国蜜环菌生物种及不同大陆间高卢蜜环菌的杂交育种研究进展,以及“菌麻协同进化”诸方面新思想。
周祖—果菌循环    真诚预祝北京2013年天麻会圆满成功
范学钧“仨菌一种成麻说”欲引领天麻产业界头脑新风暴
——我设想可从丰产天麻窝或野生天麻一窝亲穴内土壤填充料中诱集分离出“放线菌型生防菌”来促成“仨菌一种联保成麻”可持续,以激活天麻、猪苓“栽培窝用填充料料”土壤微生物之活性以最大限度发挥其“第2营养源”高效保障供给
立意组稿:范学钧     审稿演讲:赵  雄  ?
我爱天麻有趣好玩欲成蘑、层层揭秘勾上瘾半生追梦;(注:天麻蘑菇人生多成瘾当一辈子的事业做菌)
食药同源医农相依“治未病”,教民稼穑“出菜入麻”效周祖。(注:从农推黄花菜到天麻蘑菇,周先祖是中国农业推广之父)
天麻“俩菌一种”揭谜底大家欢,麻农愁叹“麻窝黑箱”邀生防菌。(注:天麻栽培像黑箱操作难可视化易烂麻)
“他日天放我”学种天麻推义兵,献“科普俩歌”教民种麻求持续。(注:天麻卷棒推广歌+砍花栽培歌)
周祖人微言轻比不上莫言,拜请赵总代我传播新思想:
“天麻四星俩菌一种”劈开产业路可持续,我辈再铺轨“菌麻一窝亲+麻窝生防菌”创民薪。
放炮“仨菌一种成麻”新学说,发动大家找出“麻窝生防菌”。(注:麻窝生防菌应以放线菌为主)
天麻俩菌一种卷棒推广歌“cove”了,天麻砍花栽培歌绝唱“菌麻一窝亲”!(注:菌麻一窝亲=合卺金婚协同进化)
意犹未尽幻想弄出“麻窝生防菌”,丰产一窝亲“麻窝生防菌”就是其国防军!
(注:天麻香菇等再生产强烈依赖于亲和性的杂木林金竹林,应大力营造放线菌结瘤固氮林木樼xiang树资源来维系菇木林的营养互补与生态平衡。天麻俩菌是其国民经济GDP再生产的主力军,则麻窝生防菌就是保障其再生产可持续的国防军)
天麻萌发菌吃树叶供初乳才使花粉发麻种(天麻萌发菌是天麻花粉种子有性繁殖阶段胚胎发育期给养动力菌,猪苓菌核伴生菌是猪苓花孢子有性繁殖阶段胚胎发育期给养动力菌)
天麻蜜环菌吃木头运粮队脐带泵养创高产(蜜环菌脐带泵营养桥是天麻猪苓形态建成期的吃木奶母动力菌)
天麻生防菌吃残料抗病虫确能保丰产(天麻窝生防菌是麻窝国防军及其一生的守护神,猪苓窝生防菌也是苓窝国防军及其一生的守护神,5406细黄放线菌就是土壤酵母型的抗生菌肥可做麻窝生防菌用)
关于寻找“麻窝生防菌”理论设想的一点说明:二战中美国国防部给参战航空兵下达了一条必须执行的奇怪命令——要求采集世界各地各类土壤样品及腐烂果菜皮生物样品,就是要掠夺各国的土壤微生物资源特别是放线菌资源及植物病原菌资源。目前人类已筛选出抗生素达9000种以上,每年还新增百余种但已商业化的不太多。其中放线菌产生的抗生素占绝对多数,而链霉菌产的抗生素又占放线菌总数的80%,故链霉菌属是放线菌研究的重点,也应是麻窝生防菌的研究重点目标放线菌类生防菌吧?
天麻抗真菌蛋白已被成功分离出来了,其体内富含的抗真菌蛋白就是一种生物自体保护免疫力表现——这就是天麻生物学进化成既要靠“俩菌”来营养自己又要保护好自己的“生物自保功能”之最大化体现。虽然天麻萌发菌、蜜环菌都或多或少有拮抗杂菌(细菌、酵母、霉菌等)功能(看徐老师《中国天麻栽培学》书131页表3-36:部分萌发菌能拮抗枯草杆菌和大肠杆菌等),但因“萌发菌发菌疲慢又磨蹭”而环境杂菌多是快速发生型的,就易导致天麻俩菌还不足以体现“麻窝生防菌”的国防军强大防保优势功能,有性繁殖萌发菌培养若用非树叶基质者多易因“豆豉发酵黑料臭窝”引发细菌、酵母、霉菌等次生污染,因此“麻窝放线菌型生防菌”就是一个最好的突破方向。中国农用抗生素创始人之一尹辛耘教授等对放线菌类的5406抗生菌肥研究推广,东北师大实验推广的老人参地轮作豆科植物紫穗槐改良土壤菌物区系、来增加土壤链霉菌的优势种群来控制病害的做法,比利时率先科技开发出的寡雄腐霉(寡雄腐霉能吃掉植物病原菌如苹果腐烂病菌,相当于植病食物链顶点的狮子,目前我国已有好几家生物公司生产推广这个生防菌产品)被誉为“欧洲农业希望之光”,这些都是值得我们天麻人学习的生防菌开发好例子。我估计农业学大寨群众性科普运动中推广的5406抗生菌肥和920农用抗菌素,引用到天麻、猪苓栽培上会对“窝际土壤”有好处——能激活土壤微生物活动保障其第2营养源来提高品质。傈天麻栽培的“带菌蕨叶苗床加松针保鲜法”要大量利用松针、半腐朽的松木块等下脚料来做“菌床麻种的植物源生防保鲜剂”,我设想这个“可用5406生防菌剂配制成饼土填充料”来代替之。在西北干旱区种麻也可因地制宜充分利用资源量大的紫花苜蓿根叶(老苜蓿根际土壤富含被称为“土壤酵母”的5406放线菌)和我的“袋水创薪技术专利”思想,研发设计出“老苜蓿根袋水型生防菌床”用来克服麻窝杂菌污染烂料和干旱胁迫吧?用“开水烫树棒”后做“开放式水培蜜环菌材”多会因后期细菌污染引发臭料难成功,能不能启用日本EM菌剂或中国红曲菌剂(中国红曲食药用已有千年历史,江浙闽盛产红曲米所富含的红曲就是多菌种共生体系,张慧等报道《红曲共生菌的分离和鉴定》指出红曲含有粉红曲霉、紫红曲霉、酿酒酵母等)等做生防菌来实现麻窝微生态调控也值得深入研究。5406是抗生菌肥微生物制剂的分离谱系编号(5-西北地区,4-苜蓿根土,06-苜蓿根上的第6号菌株),是由中国农业科学院植物保护研究所微生物研究室著名植物病理学专家尹辛耘教授从陕西泾阳老苜蓿根土壤中分离筛选出的一株放线菌——被定名为细黄放线菌,又名泾阳链霉菌,具有解钾、解磷、抗病、促生、保苗等多功能的抗生菌肥,能产生出2种抗菌物质:一种是抗细菌的分泌到菌丝体外,另外一种是抗霉菌的存在于菌丝体内,且还能拮抗有的植物病原菌防控烂根死苗发生,实验还发现5406菌对黑曲霉、木霉、枯草杆菌等有明显的抑制作用——这一点估计会对天麻、猪苓的烂窝防控有好处吧!通过文献调研理论分析,我设想“天麻窝里一定会有有益天麻生长的放线菌型生防菌(链霉菌属生活史见图1)”,目前人类已经开始揭秘极端生境的“稀有放线菌(非链霉菌属放线菌,未被发现报道过的链霉菌新属种)”研究了,但天麻、三七等高端中药材根际土壤微生物特别是放线菌研究等却还未被微生物学家过多关注,放线菌来源的抗菌素和酶制剂就是一个重点研究方向,如放线菌来源的溶细菌酶和溶霉菌酶、已可用于啤酒和葡萄糖类的澄清和无毒食品的保护剂了。初步理论筛选“麻窝放线菌型的生防菌”主要是5406放线菌,也可联用农用抗菌素920作其免疫针吧? 5406菌剂拌混饼土后可做麻窝填充料以激活麻窝放线菌孢子生长来拮抗细菌、酵母、霉菌等污染并能克制害虫滋生防控次生污染再发生,且考察5406放线菌习性可与天麻俩菌形成营养互补和微生态互补,现在就要动手做“5406放线菌在麻窝里和天麻俩菌和平共住友好实验”将会有大发现。放线菌是处细菌和真菌之间的单细胞分支丝状菌而与真菌相似、是可产生抗菌素类的益生菌类群。农业再生产环境中“土著菌”多能做其微生态系统国防军,研发“天麻窝放线菌型生防菌(含土著菌群)”将会是揭开现代天麻栽培最后难题的一把金钥匙大有开挖潜力,因此我将天麻窝里以放线菌为主的有益菌定名为“麻窝生防菌、麻窝国防菌”,赋予其微生态联保功能就是能拮抗麻窝内的各类细菌、酵母、霉菌等有害杂菌污染来保障天麻生长可持续,这样“天麻萌发菌、蜜环菌就是其GDP生产菌,麻窝生防菌就成其国防菌”。这类放线菌应该具有拮抗细菌、拮抗酵母、拮抗霉菌、拮抗害虫等诸多微生态功能,在营养生理与微生态功能定位上应与天麻俩菌相辅互补成太极推手,并能和天麻俩菌和平共住成环境友好型微生物区系,以激活天麻窖区土壤微生物系统才能最大限度的满足天麻、猪苓的“第二营养源”保障供给。开发麻窝生防菌的基本原则就是最大限度发挥自然选择与人工选择促成的“菌麻协同进化一窝亲”效应,促成“麻窝微生物和谐共住 = 生防菌益生功能表现最大化 + 天麻病原菌致病基因自然沉默”联保机制,这并不是“完全依赖于抗生素治已病”胁迫“菌麻一窝亲”丧失其天然免疫力自保屏障、而是“激活天然抗生菌治未病”来调整微生态平衡以确保“仨菌一种鼎足成麻”,由此我提出了“仨菌一种成麻”学说:“仨菌一种成麻=天麻共生萌发菌(真菌初乳促天麻种子萌发)+天麻共生蜜环菌(蜜环菌奶母吃杂木泵养天麻)+麻窝生防菌(天麻一窝亲穴内的放线菌型生防国防军)+麻种(天麻花粉种子+米白麻种)”。可通俗的把“天麻俩菌”说成是天麻国民经济生产主力菌,麻窝生防菌说成是保障天麻可持续的国防菌,二者就相得益彰互为表里吧?可说从传统的“天麻俩菌一种”揭秘发展到现代化“仨菌一种成麻”,将会是天麻现代化可持续发展历史性跨越和科技进步最后的一道门栏吧?

图 1 放线菌类链霉菌属的生活史简图
1. 孢子萌发 2. 基内菌丝体 3. 气生菌丝体 4. 孢子丝 5. 孢子丝分化为孢子
土壤是一个富含微生物群体的生命有机体,它既是一个万能的微生物群体培养基也是一个万能的藏污纳垢型生物净化器,因此土壤是微生物富矿,在土壤微生物区系内、细菌群和真菌群多会成为“动植菌三物再生产”的病原菌,而放线菌群多数是环境友好菌而会成为微生物金矿。从土壤中分离筛选微生物就是要利用各种不同微生物的生态营养的差异性来设计出高选择性培养基来诱集分离纯化培养后推广使用。理论筛选应从放线菌生物学和天麻生物学的对比联动中进行双向互动筛选,5406放线菌剂、黄石放线菌、金霉素放线菌及野生一窝亲麻窝“土著放线菌群”等,以及发酵型的酵素菌、日本EM菌群、中国红曲菌群等,一般的放线菌类可用作麻窝沙土填充料的固态发酵引导菌制成“放线菌5406饼土”使用,EM菌和红曲菌多富含发酵型的酵母菌大量需糖——用于水型蜜环菌菌床设计暨开放式水培枝条蜜环菌会有好处吧?实践筛选可用(天麻丰产窝或野生天麻一窝亲)“土壤埋片法”诱集分离或选麻型好的“天麻体表浮土”来分离(土粒法、稀释法、蔗糖梯度法等)诱集筛选分离出目标放线菌,选择性培养基可用高氏一号、二号培养基(铁盐改用组培MS的螯合态EDTA+Fe最好)或克氏一号培养基或其他选择性培养基,目前分离稀有放线菌多用高氏一号培养基加50-100ppM的重铬酸钾来克制细菌和霉菌污染。从麻窝土壤中分离诱集放线菌的土样采集法要有典型性代表性,采样时期应该在“天麻俩菌一种”旺盛生长期到秋冬采挖前,抛开表层5cm浮土后用环刀法垂直采集耕作层(天麻填充料覆土层)土样,分离放线菌最好采用新鲜土样但要加抗菌素或酚等来克制细菌污染和霉菌污染,但也可将土样在洁净的通风室内阴晾20天风干(但决不能使其受潮发霉变质)以灭除细菌隐患后再来分离放线菌菌种。放线菌的分类鉴定以菌落形态和培养特征的镜检为主、生理生化和生态特征检测为辅,定属常用菌落培养形态特征与细胞壁化学组分类相结合法。放线菌类链霉菌属的分群确属定种鉴定亦如是,最后查对中科院微生物所放线菌分类组编著《链霉菌鉴定手册》(科学出版社1975.4版)、阮继生、黄英《放线菌快速鉴定与系统分类》(科学出版社2011.4版)等进行分群确属定种。目前农用放线菌类链霉菌及其农用抗菌素主要有:吸水链霉菌井冈变种-井冈霉素,吸水刺孢链霉菌-内疗素,可可链霉菌-多抗霉素,不吸水链霉菌-769、23116等,小金链霉菌-春雷霉素,庆丰链霉菌-庆丰霉素,金霉素链霉菌-金霉素、891等,泾阳链霉菌-5406等,龟裂链霉菌-土霉素,灰色链霉菌-灭瘟素、放线菌酮,浅灰链霉菌-26杀虫素,丰加链霉菌-多效霉素,1980年发现的除草剂双丙氨磷就是吸水链霉菌属菌株Z40的代谢产物等。“永不退休的德格教授”退休后受聘到制药厂实验室还石破天惊般的弄出了金霉素、四环素等抗菌素,他由此“救活”的病人比世界上的全部医生加起来还要多——退而不休的徐老师在退休后还弄出了萌发菌,徐老师真德格第二!土壤微生物大类菌落特征比较见下表。
注:1关于放线菌类链霉菌属的进一步阅读博文学习网址链接:http://course.zju.edu.cn/eln/200 ... 209202046/text2.htm
2稀有放线菌分离方法学习:http://www.doc88.com/p-47643921108.htmlhttp://wenku.baidu.com/view/982eed0014791711cc791757.htmlhttp://wenku.baidu.com/view/982eed0014791711cc791757.html
3. 看看青海这些娃娃都分离出当地土壤中的放线菌了——天麻人学习他们弄出麻窝生防菌!
第28届北京青少年科技创新大赛http://yxw.bjchyedu.cn/TPRes/tspx/tspx28/zhongxue/332.htm
附A: 如何从土壤中分离放线菌(《放线菌研究及应用》建议用蔗糖梯度法分离放线菌)
1.按规程制作好高氏一号培养基趁热注入培养器皿中,经高压灭菌后凝成平板待用。
2.称取土壤10克,放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中,并加入10%酚10滴以抑制细菌霉菌生长。振荡10分钟制成10-1菌悬液。按连续稀释分离法进一步制成10-3菌悬液备用。
3.用移液管或微量注射器吸取0.1毫升10-3菌悬液,注入平板培养基上,用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中培养7-10天,培养基上会出现目标微生物菌落。如果菌落的硬度较大而干燥致密,且与基质紧密结合,不易被针挑起,这就是放线菌类菌落。
4.挑取放线菌类菌落,接种于斜面培养基上再纯化培养后做镜检和生理特性测试确属定种
5.放线菌选择性培养基:
①高氏1号培养基(淀粉琼脂培养基): 可溶性淀粉20g,KNO3 1g,K2HPO4 0.5g,MgSO4• 7H2O  0.5g,NaCL 0.5g,FeSO4• 7H2O 0.01g,琼脂 20g,水1000ml,pH=7.4—7.6,在压力下1.05  kg/cm2 高压灭菌20-30min。
备注:高氏1号和和改良高氏1号的差别就在于有没有FeSO4• 7H2O, 铁盐可采用配制成母液再稀释的办法来精量加入。高氏培养基常常配完后变成褐色是由于Fe2+氧化为Fe3+的关系,所以常常有人用螯合剂来螯合的FeSO4以防止氧化。改良高氏1号培养基增加了硫酸亚铁,我建议改用组培MS螯合铁盐 27.8㎎/L FeSO4•7H2O +37.3㎎/L Na2-EDTA•2H2O代替。
②面粉琼脂培养基 :面粉 60 g 琼脂 20 g 水 1000 mL 。把面粉用水调成糊状,加水到500 mL,放在文火上煮30分钟。另取500 mL水,放入琼脂,加热煮沸到溶解后,把两液调匀,补充水分调整pH值到7.4,分装灭菌备用。
③高氏2号培养基:蛋白胨  5g, NaCL 5g,葡萄糖 10g,琼脂 20g,蒸馏水1000mL。傅文仲。造纸工业防腐剂微生物检定方法试验。上海造纸1983,Z1:136-140
④改良高氏2号培养基(稀有放线菌适合):葡萄糖 1g,蛋白胨 0.5g,胰胨 0.3g,NaCL 0.5g,重铬酸钾60 mg(60ppm),复合维生素(维生素B1、核黄素、烟酸、维生素B6、泛酸钙、肌醇、p-氨基苯甲酸各0.5 mg,生物素0.25 mg),琼脂 20g,水1 000 mL,pH 7.2。程新, 徐波,魏赛金,邱秀文, 涂国全。1株产α-糖苷酶抑制剂的稀有放线菌分离与鉴定。食品与发酵工业2008(9):58-60
附B:土著菌群的分离筛选与如何自行培育EM生物菌剂?
EM有效微生物菌剂是一种新型的复合微生物制剂,是目前世界上应用最为广泛的微生物工程技术之一。EM呈棕色半透明状液体,PH值在3.5~4.5之间,由光合菌,乳酸菌,酵母菌,放线菌群,醋酸杆菌等5个科10个属80多种厌氧性或嫌氧性正常微生物复合培养而成,不含任何化学有害物质,无毒副作用不污染环境。土著菌群就生活在我们周围的自然环境中,走进阔叶树林或竹林,在落叶且腐殖质多地方,扒开树叶或杂草就可以看到细丝状白色菌落,这就是有益的土著微生物。土著微生物也是多种有益微生物的混合群,土著微生物按需气性分有好气菌、嫌气菌;按菌类分有酵母菌、曲霉菌、放线菌、乳酸菌、芽孢菌等。 可以在不同的季节、不同的地点采集不同的菌种。采集到的原始菌种应放在室内阴凉、干燥处保存。玉溪黄草坝竹林下野生黄天麻窝就多有这类土著菌吧?  
    土著菌采集方法(普通型土著菌诱集引菌办法有麦粒诱集、大米饭团诱集、豆腐块诱集、馒头诱集等,寡雄腐霉要用其食物型病原菌来引诱)
1.旱田和森林腐叶土内土著菌的诱集引菌
1)采集地方:可以在当地落叶聚集较多的山谷树林中采集,麻窝放线菌就在丰产天麻窝或野生天麻一窝亲穴内诱集。
2)具体办法:把做的稍微有一点硬的大米饭(1kg~1.5kg),装入用干净杉木板做的小木箱(25cm×20cm×10cm)约1/3,大米饭上面盖上宣纸封好口,将其埋在当地山上落叶聚集较多的山谷树林中。为防止野生动物糟蹋,木箱最好罩上铁丝网。夏季经3~5天,春秋经6~7天,周边的土著微生物就会潜入到米饭中,在米饭上形成白色菌落(放置时间稍长时会形成各种颜色菌落,虽然也能利用,但最好还是用白色菌落)。
3)扩培方法:把变稀软状态的米饭取回后装入坛子里,土著菌采集成功后掺入原材料量1/3左右的红糖,将其混合均匀(数量按坛子容量的三分之一),把变的稀软状态的米饭装入坛子里,盖上宣纸用线绳系好口,放置在温度18℃左右地方。大约放置7天左右就会变成浓稠液体状态,饭粒多少会有些残留但不碍事。简单过滤后就是土著微生物菌种原液。用的时候直接稀释后和EM菌种原液一起使用!
2.水稻田的土著微生物采集方法
  秋天在刚收割后的稻茬上有白色液体溢出。把装好米饭并盖宣纸的木箱倒扣在稻茬上,这样稻茬穿透宣纸接触米饭,很容易采集到稻草菌。约7天后木箱的米饭变成粉红色稀泥状态,同(1)方法,米饭与红糖以2:1比例拌匀装坛子、盖宣纸、系绳。5-7后内容物变成原液(原原种)。
3.提纯复壮——有条件的可以在实验室进行(以下步骤适用于菌种生产单位实验室!普通用户可以不做!)。一般情况下采来的样品可以直接进行分离,但是如果样品中我们所需要的菌类含量并不很多,而另一些微生物却大量存在。此时为了容易分离到所需要的菌种,让无关的微生物至少是在数量上不要增加,即设法增加所要目标菌种的数量,以增加分离的几率。可以通过选择性的配制培养基(如营养成分、添加抑制剂等),选择一定的培养条件(如培养温度、培养基酸碱度等)来控制。具体方法是根据微生物利用碳源的特点,可选定糖、淀粉、纤维素,或者石油等,以其中的一种为唯一碳源,那么只有利用这一碳源或氮源的微生物才能大量正常生长,而其他微生物就可能死亡或淘汰。对G一菌有选择的培养基(如结晶紫营养培养基等)通常含有5%~10%的天然提取物。在分离细菌时培养基中添加浓度一般为50μg/mL的抗真菌剂(如放线菌酮和制霉素)可以抑制真菌的生长。在分离放线菌时通常于培养基中加入1~5mL天然浸出汁(植物、岩石、有机混合腐质等的浸出汁)作为最初分离的促进因子,由此可以分离出更多不同类型的放线菌类型;放线菌还可以十分有效地利用低浓度的底物和复杂底物(如几丁质),因此大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的,而不是在含丰富营养的生长培养基上分离的;在放线菌分离琼脂中通常加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮,以抑制真菌的繁殖;此外为了对某些特殊种类的放线菌进行富集和分离,可选择性地添加一些抗生素(如新3霉素)。在分离真菌时,利用低碳/氮比的培养基可使真菌生长菌落分散,利于计数、分离和签定;在分离培养基中加入一定的抗生素如氯霉素、四环素、卡那霉素、青霉素、链霉素等即可有效地抑制细菌生长及其菌落形成;抑制细菌的另外一些方法有:在使用平皿之前,将平皿先干燥3~4天;降低培养基的pH值或在无法降低pH时,加入1:30000玫瑰红。这样有利于下阶段的纯种分离。 通过增殖培养,样品中的微生物还是处于混杂生长状态。因此还必须分离纯化。增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用,而且要控制得细一点,好一点。同时必须进行纯种分离,常用的分离方法有稀释分离法、划线分离法和组织分离法。稀释分离法的基本方法是将样品进行适当稀释,然后将稀释液涂布于培养基平板上进行培养,待长出独立的单个菌落,进行挑选分离。划线分离法要首先倒培养基平板,然后用接种针(接种环)挑取样品,在平板上划线。划线方法可用分步划线法或一次划线法,无论用哪种方法,基本原则是确保培养出单个菌落。组织分离法主要用于食用菌菌种或某些植物病原菌的分离。分离时,首先用10%漂白粉或0.1%升汞液对植物或器官组织进行表面消毒,用无菌水洗涤数次后,移植到培养皿中的培养基上,于适宜温度培养数天后,可见微生物向组织块周围扩展生长。经菌落特征和细胞特征观察确认后,即可由菌落边缘挑取部分菌种进行移接斜面培养。 对于有些微生物如毛霉、根霉等在分离时,由于其菌丝的蔓延性,极易生长成片,很难挑取单菌落。常在培养基中添加0.1%的去氧胆酸钠或在察氏培养基中添加0.1%的山梨糖及0.01%的蔗糖,利于单菌落的分离。经过分离培养,在平板上出现很多单个菌落,通过菌落形态观察,选出所需菌落,然后取菌落的一半进行菌种鉴定,对于符合目的菌特性的菌落,可将之转移到试管斜面纯培养。这种从自然界中分离得到的纯种称为野生型菌株,它只是筛选的第一步,所得菌种是否具有生产上的实用价值,能否作为生产菌株,还必须采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,以求得适合于工业生产用菌种。这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,以求得适合于工业生产用菌种。如果此野生型菌株产量偏低,达不到工业生产的要求,可以留之作为菌种选育的出发菌株。活性好的土著菌可以用由人工培养、扩培成纯度高的微生物菌群!
庆阳范学钧 2013年10月草于中国农业文化博览馆庆阳分馆  周祖故里
中国中医药文化博览馆庆阳分馆  歧伯桑梓
易菇网  赵雄  ? 2013年10月于北京昌平天麻会
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